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鼻渊净胶囊为纯中药内服制剂[批准文号:总制字(2016)F405004],由苍耳子、辛夷、连翘、白芷、羌活、野菊花等六味中药组成,具有散风消炎、宣通鼻窍、稀化鼻窦与气管粘稠分泌物的功效,主要用于鼻渊的治疗。由于该制剂原有质量标准制定年代久远,质量控制仅有白芷一味药材的薄层鉴别,主要药味均无含量测定项,不能较好地反映制剂质量,本课题组前期对其原有的工艺参数进行了优选[1],并进行了质量标准研究。新的质量标准增加了辛夷、连翘、羌活、野菊花四味药的薄层定性鉴别,并建立了辛夷中木兰脂素、连翘中连翘苷、白芷和羌活中欧前胡素、野菊花中蒙花苷等主要成分的HPLC含量测定[2],本研究在此基础上,建立了鼻渊净胶囊的HPLC指纹图谱,拟从多成分角度对其质量进行全面控制,进一步保证制剂的质量均一和临床用药安全。
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精密度试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.62%,平均相对峰面积的RSD为1.17%,在该方法下的精密度良好;重复性试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.29%,平均相对峰面积的RSD为1.15%,在该方法下重复性良好;稳定性试验结果显示各共有峰平均相对保留时间的RSD为0.90%、平均相对峰面积的RSD为1.10%,样品在12 h内稳定。
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以批号150901(S1)的指纹图谱作为参照谱,多点校正,采用中位数法生成对照指纹图谱,结果见图1。
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分析结果确定鼻渊净胶囊有20个共有指纹峰,其中峰9为鼻渊净胶囊的指标成分木兰脂素,该峰吸收信号最强、保留时间适中,峰形较好且稳定,故将其作为参照峰。鼻渊净胶囊指纹图谱见图2。
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比较10批鼻渊净胶囊的色谱图,以木兰脂素峰(峰9)的保留时间和色谱峰面积为1,分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,结果见表1和表2。
峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.135 0.145 0.140 0.138 0.138 0.138 0.139 0.138 0.145 0.146 2 0.238 0.238 0.239 0.237 0.239 0.239 0.240 0.238 0.238 0.238 3 0.371 0.370 0.371 0.376 0.371 0.371 0.372 0.371 0.371 0.371 4 0.409 0.408 0.409 0.409 0.409 0.409 0.411 0.409 0.410 0.409 5 0.430 0.430 0.431 0.430 0.431 0.430 0.432 0.430 0.431 0.431 6 0.520 0.520 0.521 0.520 0.521 0.520 0.522 0.520 0.521 0.521 7 0.801 0.801 0.802 0.801 0.801 0.801 0.800 0.801 0.800 0.801 8 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.953 0.952 0.953 0.952 0.953 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 1.046 11 1.094 1.093 1.094 1.107 1.093 1.094 1.095 1.094 1.094 1.094 12 1.158 1.157 1.157 1.157 1.157 1.157 1.159 1.158 1.158 1.158 13 1.200 1.200 1.200 1.199 1.199 1.199 1.201 1.199 1.201 1.200 14 1.238 1.237 1.237 1.238 1.237 1.237 1.237 1.237 1.239 1.238 15 1.345 1.344 1.344 1.345 1.341 1.344 1.346 1.344 1.347 1.345 16 1.510 1.509 1.509 1.509 1.509 1.509 − − 1.512 1.509 17 1.596 1.595 1.596 1.583 1.595 1.596 1.585 1.581 1.599 1.595 18 1.625 1.625 1.626 1.619 1.626 1.627 − − 1.628 1.624 19 1.684 1.683 1.684 1.684 1.683 1.684 − − 1.687 1.683 20 1.748 − 1.749 1.748 1.748 1.748 1.751 1.746 1.752 1.749 峰号 批次 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.053 0.043 0.267 0.293 0.113 0.173 0.117 0.183 0.070 0.075 2 0.046 0.022 0.146 0.163 0.025 0.124 0.082 0.076 0.044 0.046 3 0.022 0.019 0.018 0.044 0.061 0.029 0.027 0.031 0.022 0.022 4 0.077 0.040 0.122 0.189 0.054 0.111 0.094 0.107 0.072 0.074 5 0.122 0.015 0.032 0.039 0.156 0.223 0.190 0.114 0.113 0.120 6 0.066 0.089 0.038 0.073 0.156 0.198 0.102 0.127 0.063 0.063 7 0.068 0.100 0.032 0.071 0.115 0.130 0.087 0.118 0.068 0.069 8 0.308 0.420 0.392 0.319 0.347 0.370 0.359 0.327 0.296 0.308 9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 10 0.341 0.227 0.203 1.426 0.452 0.248 0.252 0.293 0.338 0.334 11 0.163 0.274 0.230 0.095 0.095 0.209 0.235 0.178 0.170 0.162 12 0.168 0.202 0.125 0.075 0.099 0.116 0.046 0.057 0.160 0.164 13 0.031 0.016 0.026 0.045 0.037 0.025 0.028 0.029 0.033 0.033 14 0.092 0.122 0.066 0.038 0.066 0.099 0.010 0.015 0.091 0.093 15 0.024 0.027 0.028 0.023 0.046 0.039 0.029 0.069 0.020 0.019 16 0.046 0.037 0.029 0.007 0.032 0.037 − − 0.046 0.046 17 0.224 0.290 0.203 0.333 0.150 0.201 0.074 0.120 0.220 0.220 18 0.046 0.053 0.033 0.018 0.019 0.036 − − 0.049 0.048 19 0.031 0.031 0.021 0.012 0.009 0.021 − − 0.033 0.031 20 0.183 − 0.083 0.232 0.040 0.117 0.235 0.337 0.174 0.1867 -
指纹相似度在0.9~1.0之间,各批次之间的相似性较强,说明鼻渊净胶囊的制备工艺及样品分析方法稳定可行,相似度结果见表3。
样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照图谱 相似度 0.979 0.952 0.966 0.951 0.932 0.959 0.936 0.920 0.949 0.948 1.000 -
采用对照品对照法对共有峰进行确认,取“2.1”项下配制的各对照品溶液,按照“2.2.1”项下色谱条件进行检测,在对照品溶液保留时间处,供试品溶液的色谱峰与对照品色谱峰的在线UV图一致,由此来判断共有峰化学成分的归属。通过此方法,判断4号峰为连翘苷,5号峰为蒙花苷,9号峰为木兰脂素,15号峰为欧前胡素,17号峰为异欧前胡素(见图3)。
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采用各单味药阳性对照试验,取“2.1”项下各单味药材溶液,按照“2.2.1”项下的色谱条件进行测定。通过比较各色谱峰的保留时间和UV光谱图,对鼻渊净胶囊样品中共有峰的来源进行追溯。结果表明,峰1、2、4、6、7来自连翘,峰5来自野菊花,峰8~13来自辛夷,峰15、17、20来自白芷,其中峰17、20为羌活和白芷的共有峰。