Study on quality standard for Xuanxi Rongjin powder

LC-20AD岛津高效液相色谱仪（日本）； 紫外检测器。

玄膝荣筋散（批号：140601、131226、140701，规格：250g/袋），由南京政治学院门诊部提供；桂皮醛（对照品，批号：110710-201418，中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

取本品5 g，加乙醚20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液低温挥去乙醚，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取川芎对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取缺川芎的阴性样品，同法制备阴性对照液。吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯 (9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验样品未见干扰，见图1。

取本品粉末15 g，加甲醇50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取穿山龙对照药材0.5 g，加甲醇25 ml，同法制成对照药材溶液。取缺穿山龙的阴性样品，同法制备阴性对照液。吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水 (13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验样品未见干扰，见图2。

色谱柱：KR100-5C₁₈ (250mm×4.6mm ；5μm， E14878)；流动相：乙腈-水（35∶65）;流速：1.0 ml/min；检测波长290 nm；进样体积：10 μl。在此条件下，样品中桂皮醛与基线达到良好分离，见图3。

取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含桂皮醛 15 µg的溶液，即得。

取样品（过四号筛）粉末约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入80 %乙醇25 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用 80 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

按处方量制备缺桂枝的阴性样品，按供试品溶液方法制备阴性对照溶液。

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰（见图3）。

取桂皮醛对照品适量，加甲醇溶解并制成每1 ml含0.0326 mg溶液，作为对照品溶液5,将溶液5分别稀释为0.00489、0.008150、0.0163、0.02445 mg/ml四种浓度，作为对照品溶液1～4。精密吸取上述对照品溶液1～5各10μl，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定峰面积，以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=10181123.15X+6639.54，r=1.00，结果表明：桂皮醛在0.0489~0.3260 µg/ml范围内有良好的线性关系。

精密吸取“2.2.3”项下供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6次。结果峰面积的RSD为1.07%（n=6），表明仪器精密度良好。

取同一批号的玄膝荣筋散（批号140601）按“2.2.3”项下制备方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，测得桂皮醛峰面积RSD为1.12%，结果表明此法重复性良好。

取同一批号的玄膝荣筋散（批号140601）样品，精密称定，照上述含量测定方法，精密吸取10 µl, 分别在0、2、4、8、12、24 h进样，测定一次。结果桂皮醛峰面积的RSD为0.95%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

取同一批号的玄膝荣筋散（批号140601）0.5 g，精密称定，分别精密加入桂皮醛（0.00815 mg/ml）对照品溶液25 ml，按“2.2.3”项下制备方法平行制备6份供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，结果见表1。

取3批样品，按上述供试品溶液制备方法处理，进样，计算桂皮醛的含量，见表2。

桂皮醛为桂枝药材的主成分，经紫外吸收光谱扫描（200～400 nm），在291 nm处有最大吸收，故确定检测波长为290 nm。

参照2020版《中国药典》^[1] 中桂皮醛含量测定的方法，分别取样品2.0251、1.0530、0.5169 g，加入不同浓度的乙醇、甲醇等，超声处理20、30、40 min，按照正文的含量测定项下方法进行测定。结果表明，最终选择取样量为1g，选用80%乙醇为溶剂，在超声30 min后提取较完全。

　　建立该制剂中川芎、穿山龙的薄层色谱鉴别方法，拟增加黄芪、甘草的薄层实验中，因存在阴性试验样品有干扰的问题，故未列入正文。对TLC方法，分别从温度（10 °C和35 °C）、相对湿度（42%和88%）以及不同硅胶板（国产和进口）等方面进行考察。在各试验条件下，鉴别结果不受温度、相对湿度和不同硅胶板等条件改变的影响。说明本文所建立的薄层色谱方法作为定性鉴定方法具有很强的适用性。

本实验运用高效液相色谱法建立了桂皮醛含量测定的方法，经过试验验证，该法灵敏度高、专属性好、操作简便、重现性好，可作为该制剂生产过程中的质量控制及检验手段，更好把控药品疗效与临床用药安全。