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实脾消水浸膏为中日友好医院的自制中药制剂,来源于中西医结合肿瘤内科李佩文教授的经验方“消水Ⅱ号”,处方由黄芪、车前子、红花等组成,具有益气活血、渗湿利水的功能,临床用于癌性胸腹水的辅助治疗,能明显的延长晚期肿瘤患者的生存期,提高晚期肿瘤患者的生存质量[1-3]。到目前为止,该制剂在院内已使用近三十年,由于这种浸膏剂使用不方便,因此,根据临床需要,本课题组将其改为凝胶贴膏剂。为了更好地控制它的质量,本文采用薄层色谱法(TLC)对其中的黄芪、车前子、莪术、桂枝、猪苓、预知子进行定性鉴别,采用超高效液相色谱-串联质谱法对制剂中君药黄芪所含成分黄芪甲苷进行含量测定,现报道如下。
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取本品1片,除去保护膜后,称取药膏10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 ml使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次30 ml,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20 ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇5 ml使溶解,加于中性氧化铝柱(100~120目,5 g,内径为10~15 mm)上,用40%甲醇100 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5 ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取除黄芪外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备黄芪的阴性对照溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法[4],吸取供试品溶液、阴性溶液各6 μl,黄芪甲苷对照品溶液1 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷‐甲醇‐水(13:5:0.6)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点,且阴性无干扰,结果见图1A。
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取本品1片,除去保护膜后,称取10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加热水20 ml使溶解,加于D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm,柱高为12 cm)上,用水100 ml洗脱,弃去水液,再用30%乙醇100 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取京尼平苷酸、毛蕊花糖苷对照品,加甲醇分别制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。再取除车前子外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备车前子阴性溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法,吸取上述三种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以乙酸乙酯‐甲醇‐甲酸‐水(18:2:1.5:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性无干扰,结果见图1B。
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取本品1片,除去保护膜,称取药膏10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,过滤,滤液挥干,残渣加水30 ml使溶解,加石油醚(30~60 ℃)振摇提取2次,每次20 ml,合并石油醚液,蒸干,残渣加无水乙醇4 ml使溶解,作为供试品溶液。另取吉马酮对照品,加无水乙醇制成每1 ml含0.4 mg的溶液,作为对照品溶液。另取除莪术外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备莪术阴性对照溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法,吸取上述三种溶液各10 μl,以石油醚(30~60 °C)-丙酮-乙酸乙酯(94∶5∶1)为展开剂,点于同一硅胶G薄层板上,展开,取出,晾干,喷以2 %香草醛硫酸溶液,在105 °C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性无干扰,结果见图1C。
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取本品1片,除去保护膜,称取药膏10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,滤过,滤液挥干,残渣加热水30 ml使溶解,加三氯甲烷振摇提取2次,每次30 ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取桂枝对照药材2 g,加乙醚10 ml,浸泡30 min,时时振摇,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷l ml使溶解,作为对照药材溶液[5]。取除桂枝外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备桂枝阴性对照溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法,吸取上述三种溶液各20 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90 °C)‐乙酸乙酯(17:3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性无干扰,结果见图1D。
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取本品1片,除去保护膜,称取药膏10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,过滤,滤液蒸干,残渣加热水30 ml使溶解,加三氯甲烷振摇提取2次,每次30 ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1.5 ml使溶解,作为供试品溶液。另取麦角甾醇对照品,加甲醇制成每l ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取除猪苓外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备猪苓阴性对照溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各20 μl、对照品溶液1 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90 °C)-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸溶液,在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性无干扰,结果见图1E。
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取本品1片,除去保护膜,称取药膏10 g,加甲醇100 ml,加热回流1 h,过滤,滤液挥干,残渣加热水20 ml使溶解,加于D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm,柱高为12 cm)上,用水100 ml洗脱,弃去水液,再用90%乙醇100 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取预知子对照药材1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇100 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率300 W,频率50 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液10 ml,蒸干,残渣加甲醇l ml使溶解,作为对照药材溶液。取除预知子外的其他药材制成凝胶贴膏,按照上述方法制备预知子阴性对照溶液。按照《中国药典》2020年版的薄层色谱法,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各12 μl,对照药材溶液2 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷‐甲醇‐水(13:4:1) 的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性无干扰,结果见图1F。
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色谱条件:色谱柱为ACQUITY UPLC®BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);流速:0.2 ml/min;柱温:40 ℃;进样量:1 μl;流动相:A为含0.1%甲酸的乙腈溶液,B为0.1%甲酸溶液,梯度洗脱(0~12 min,10%→90% A;12~13 min,90% A;13~13.5 min,90%→10% A;13.5~16 min,10% A)。
质谱条件:电喷雾离子(ESI)源,正离子检出模式,离子源温度:350 ℃,喷雾电压:3.5 kV,S-Lens RF电压:50 V,毛细管温度:320 ℃,鞘气和辅助气均为高纯氮气(纯度>99.99%),鞘气压力:45 arb:辅助气压力:10 arb。数据采集采用一级全扫描(m/z 783.47~787.47),分辨率:70 000。
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精密称取黄芪甲苷对照品11.0 mg,置于100 ml量瓶中,加60%甲醇适量溶解并定容至刻度,摇匀,即得对照品储备液。精密量取黄芪甲苷对照品储备液25 ml,置于50 ml量瓶中,用60%甲醇定容,即得黄芪甲苷对照品溶液(每1 ml溶液含黄芪甲苷55 μg)。
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揭去实脾消水凝胶贴膏覆膜和背衬材料,取膏体约5.0 g,精密称定,加入甲醇50 ml,称定重量,超声提取30 min,冷却到室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.22 μm)滤过,即得。
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按处方工艺制备不含黄芪的实脾消水凝胶贴膏阴性样品,按“2.2.3”项下方法制备阴性对照溶液。
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分别吸取黄芪甲苷对照品储备液、供试品溶液和阴性对照溶液各1 μl,按“2.2.1”项下色谱和质谱条件进行测定。在正离子全扫描模式下黄芪甲苷色谱峰分离度良好,对照品及供试品溶液目标峰的保留时间一致,且阴性对照溶液无干扰(图2)。
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分别精密量取黄芪甲苷对照品溶液0.5、1、2、4、6 ml,置于10 ml量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,按“2.2.1”项下色谱和质谱条件进行测定,进样1 μl,记录峰面积。以黄芪甲苷的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得回归方程Y=0.967 7X+14.86,r=0.999 9,结果表明黄芪甲苷质量浓度在2.75~33 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
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精密吸取同一对照品溶液1.0 μl,连续进样6次,测定峰面积,结果黄芪甲苷峰面积的RSD为2.42%,表明仪器精密度良好。
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取批号为20180102的样品6份,精密称定,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.1”项下条件进样测定峰面积,并计算含量,结果黄芪甲苷的含量分别为10.15、10.67、10.56、10.28、10.46、10.39 μg/g,RSD为1.81%,表明该方法重复性良好。
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取“重复性试验”项下其中一份供试品溶液,于0、2、4、6、8、12、24 h分别进样测定峰面积,结果黄芪甲苷峰面积的RSD为2.53%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
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取实脾消水凝胶贴膏(批号:20180102)6份,每份约2.5 g,精密称定,分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(5.5 μg/ml)1 ml,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.1”项下色谱条件进样测定峰面积,并计算回收率,结果平均回收率为102.79%,RSD为2.22%。
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分别取3批次实脾消水凝胶贴膏,按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.1”项下色谱和质谱条件检测,测定峰面积,计算黄芪甲苷的含量,结果见表1。
批号 黄芪甲苷 平均值 20180102 10.42 20180115 10.57 10.5 20180203 10.63
TLC identification and quantitative determination of Shipi Xiaoshui gel plaster
doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202205054
- Received Date: 2022-05-16
- Rev Recd Date: 2023-05-16
- Available Online: 2023-11-25
- Publish Date: 2023-11-25
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Key words:
- Shipi Xiaoshui gel plaster /
- quality standard /
- thin layer chromatography /
- UPLC-MS /
- astragaloside Ⅳ
Abstract:
Citation: | MA Bingzhi, LIANG Yingying, WANG Haiyang, TANG Yonghe, LI Dong, HE Jun. TLC identification and quantitative determination of Shipi Xiaoshui gel plaster[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2023, 41(11): 662-665, 679. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202205054 |