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河豚毒素(TTX)属于氨基全氢化喹唑啉化合物,分子式为C11H17O8N3,分子量为319。其分子结构类似于生物碱[1],呈独特的笼形,如图1。河豚毒素粗品为黄褐色粉末,纯品为白色晶体,呈弱碱性,容易潮解,微溶于水溶液,易溶于无机酸水溶液,且在弱酸条件下稳定;对于热不敏感,但在高温下毒性会增强,强酸强碱条件下其结构可被破坏[2]。
河豚毒素是一种高效的神经类毒素,由于能够特异性的阻断Na+离子通道,进而产生麻痹作用,因此低浓度的河豚毒素被认为是一种优良的神经类候选药物,一直受到科研人员尤其是新药研发人员的关注[3]。目前已有将河豚毒素作为止痛药[4-5]和成瘾戒断药[6]的相关探索和研究。由于河豚毒素在药学领域有着广阔前景,关于其药学应用的研究报道逐年增多,但大多集中在分析方法[7]、药理机制[8]或药物载体研究[9],对其可成药性的相关研究报道较少。本文按照新药研发要求,建立高效液相反相离子对色谱法,对河豚毒素在不同溶剂中的溶解性和不同pH环境中的稳定性进行考察,为河豚毒素的处方前研究积累数据,为其进一步临床应用提供有力支撑。
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分别将对照品储备液及供试品储备液用0.1%磷酸溶液稀释至0.1 mg/ml,作为对照品溶液和供试品溶液,按“2.1”项进行测试。如图2所示,TTX的保留时间为22.665 min。理论板数为14 501,供试品溶液中主峰与邻峰的分离度为6.4。结果表明,此色谱条件可以满足TTX相关测试要求。
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取对照品储备液,用0.1%磷酸溶液配制浓度为4、10、20、40、80 μg/ml的TTX对照品测试溶液,按“2.1”项进行测试。以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得回归方程为Y=12 601.2X–2 263.69(r=0.999 9)。结果表明,TTX的浓度与峰面积在测试范围内呈良好线性关系。
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取对照品储备液,用0.1%磷酸溶液分别稀释至10、20、40 μg/ml的溶液各3份,按“2.1”项进行测试,计算其含量的平均值为101.000%,RSD为0.60%,表明该方法准确度良好,满足测试要求。
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取供试品溶液,按“2.1”项重复测试6次,计算得到的RSD为0.17%,表明该方法重复性良好。室温分别放置0、2、4、6、8、10、12、24、48 h后按“2.1”进行测试。计算得到的RSD为1.48%,表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。
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由表1结果可看出,TTX几乎不溶于碱性水溶液,但溶解度随着pH值降低而逐渐增大,易溶于pH值为3.5的酸性水溶液。
pH值 3.5 4.5 5.0 6.5 7.0 7.4 8.0 $ \bar{\rm{x}} $(mg/ml) 264.63 31.35 4.64 1.02 0.47 0.21 0.05 SD(mg/ml) 5.54 0.75 0.08 0.046 0.015 0.002 7 0.001 -
实验结果表明,强碱对TTX的破坏能力最强,在0.1mol/L氢氧化钠溶液中、70 ℃条件下反应20 min后,TTX被完全降解。强酸对TTX的破坏能力次之,TTX在70 ℃、0.1mol/L HCl溶液中反应20 min后的降解率为60.78%;氧化对TTX的破坏能力相对最弱,在30% H2O2溶液中反应20 min后的降解率为17.06%。
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不同介质、不同温度条件下TTX稳定性试验结果见图3。当溶剂为pH值=7.4的PBS溶液时,不同温度下TTX均表现出降解趋势,在25 ℃与37 ℃条件下保存28 d的TTX溶液降解率均超过50%,在37 ℃时PBS溶液中的TTX降解率更高达88.07±0.27%,提示在后续剂型研究中,需注意TTX在体外释放液中的稳定性。以0.1%甲酸溶液或0.1%柠檬酸溶液为溶剂的TTX溶液则较为稳定,在25 ℃和37 ℃下保存28 d含量均未表现出显著性变化。
Preliminary pre-prescription study of Tetrodotoxin
doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202304024
- Received Date: 2023-04-14
- Rev Recd Date: 2023-08-14
- Available Online: 2023-09-25
- Publish Date: 2023-09-25
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Key words:
- Tetrodotoxin /
- HPLC /
- Stability /
- Solubility
Abstract:
Citation: | XU Jiren, ZHENG Ziyun, LI Yuan, LU Ying, CHU Zhiyong. Preliminary pre-prescription study of Tetrodotoxin[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2023, 41(9): 544-546, 551. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202304024 |