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METRNL(Metrn-like)蛋白是近年来发现和证实的新的分泌蛋白[1-2],其与METRN构成了一个两蛋白的新蛋白家族。虽然最初的研究表明,该家族蛋白均可促进神经细胞轴突的生长[2-4],但两者表达差异很大,METRN在中枢神经系统中高特异性表达,而METRNL则在全身较为广泛地表达,提示其可能具有更广泛的生理功能[1-2, 5-6]。
最近的研究发现,METRNL对代谢具有重要的调节作用。其在脂肪组织中表达较高,特别是皮下脂肪,被认为是一种新的脂肪因子[1]。研究发现,该蛋白可以调节脂肪细胞的分化,脂肪细胞中METRNL过表达可提高全身胰岛素敏感性,减少脂肪炎症扩大脂肪细胞的体积等[7]。也有研究发现,METRNL可以在运动后由肌肉组织增加分泌,促进脂肪组织棕色化,从而提高代谢率,减轻体重和改善胰岛素敏感性[8]。这些研究提示,METRNL可能与提高胰岛素敏感性相关。
噻唑烷二酮类药物,如罗格列酮,可以通过激动PPARγ受体,提高胰岛素增敏性,被称为胰岛素增敏剂。但是这类药物与METRNL蛋白之间的关系,至今尚不清楚。我们前期的研究发现,白色脂肪组织中METRNL过表达可以提高PPARγ的表达,促进脂肪重构,降低白色脂肪炎症,但是激动PPARγ对METRNL表达的影响尚未有报道。
本研究拟通过高脂饮食(HFD)诱导的胰岛素抵抗小鼠模型,检测血液METRNL的浓度变化;通过给予胰岛素增敏剂罗格列酮治疗,构建胰岛素增敏动物模型,检测血液中METRNL的水平变化,从而明确激动PPARγ对血液METRNL水平影响,通过实时定量PCR检测不同组织中METRNL的表达,明确PPARγ通过何种组织调控METRNL的表达与血液浓度。
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12周龄的雄性C57BL/6小鼠与小鼠饲料,均购自上海斯莱克实验动物有限公司。为检测胰岛素抵抗对METRNL表达的影响,分两组小鼠,每组8只,分别给予正常饮食(NCD)和HFD,均饲养4个月;为了检测胰岛素增敏对于METRNL表达的影响,分两组小鼠,每组8只,两组均先HFD饲养3个月,而后实验组的饲料中加入药物罗格列酮(胰岛素增敏组),剂量为10 mg/kg·d,治疗1个月,对照组继续HFD饲养1个月。
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小鼠禁食18 h,腹腔注射30%葡萄糖溶液(2 g/kg),分别在0、30、60、90、120 min取尾静脉血,采用强生血糖仪(OneTouch Ultra)检测小鼠血糖水平。
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戊巴比妥钠麻醉小鼠后(80 mg/kg),心脏取血收集血液,室温静置2 h,3000 r/min离心20 min,取上清液。采用小鼠METRNL ELISA试剂盒(购自美国R&D biosystem公司)检测血清中METRNL浓度。操作步骤参照试剂盒说明书。
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取小鼠附睾周围白色脂肪、肩胛骨间棕色脂肪、肝脏、腓肠肌、脑组织、肾脏、脾脏组织,采用TRIzol试剂(购自美国Invitrogen公司),按照说明书抽提组织总RNA,用RT-PCR逆转录试剂盒(购自中国TARARA公司)逆转录为cDNA。1 μg的cDNA用于检测METRNL的表达,GAPDH作为内参。采用2−ΔΔCt法与SYBR® Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)试剂,反应条件为,95 ℃,5 min, 1个循环;95 ℃, 15 s,60 ℃,30 s,72 ℃,30 s,40个循环。相关引物序列见表1。
基因 上游序列(5'—3') 下游序列(5'—3') METRNL CTGGAGCAGGGAGGCTTATTT GGACAACAAAGTCACTGGTACA GAPDH GTATGACTCCACTCACGGCAAA GGTCTCGCTCCTGGAAGATG ERRα GCCG CGATGTCCTTTTGTG CTGTACTCGATGCTCCCTGC UCP-1 CACGGGGACCTACAATGCTT ACAGTAAATGGCAGGGGACG clec10a TGGTGTCTTGGTTTCCGTCC AGCTCCTAGCTCTCCTTGGC Mrc-1 CTCTGTTCAGCTATTGGACGC TGGCACTCCCAAACATAATTTGA Lipe GTTATGAGTGCGCTCCGAGA GAGCAAAGCTAGAGTCGGGG LPL GGTTGCGCGTAGAGAGGATG CTCACGCTCTGACATGCCTTC FABP4 AAGGTGAAGAGCATCATAACCCT TCACGCCTTTCATAACACATTCC CD36 ATGGGCTGTGATCGGAACTG TTTGCCACGTCATCTGGGTTT -
所有数据均用(
$ \bar x \pm s $ )表示,用SPSS 10.0处理。两样本均数比较采用t检验。
The increasement of blood METRNL protein by insulin sensitizer rosiglitazone
doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308053
- Received Date: 2023-08-25
- Accepted Date: 2024-02-13
- Rev Recd Date: 2024-02-13
- Available Online: 2024-04-24
- Publish Date: 2024-04-25
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Key words:
- insulin sensitizer /
- rosiglitazone /
- METRNL /
- insulin resistance
Abstract:
Citation: | XU Fei, CHEN Jin, LI Zhiyong. The increasement of blood METRNL protein by insulin sensitizer rosiglitazone[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(4): 165-168. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202308053 |