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参芪地黄汤,源于清代医家沈金鳌的《杂病犀烛》,作为中医经典方剂,具有益气养阴,滋肾健脾之功效,在临床上广泛应用于治疗肾病及前列腺疾病[1-2]。加味参芪地黄汤是在由六味地黄汤的基础上加补气药而成[3],其中,熟地黄具有滋肾的功效,怀山药和茯苓兼具补肝渗湿之效,温肝之山茱萸,泽泻与丹皮具有泄浊清肝的作用。此外,该方在补肝益肾方的基础上再伍以党参,黄芪以益气补脾,实则扩大了六味地黄丸的临床应用范围。此外,黄芪具有健脾益气的功效,补肾填精之熟地黄,两药具有固护正气之功效,共为君药。臣药为益气生津之党参和补益肝肾并能涩精之山萸肉、补脾阴又能固精之山药。山萸肉具有补益肝肾和涩精益阴的功效,可平补肾之阴阳,补脾肾阴、固肾亦能除湿之山药,与熟地黄三药相配,肾、肝、脾三脏共补,是为“三补”,泽泻具有利湿泄浊的功效,牡丹皮清热泻火,茯苓淡渗脾湿,是为“三泻”。三补三泻,平补阴阳,可补脾益肾。文献报道显示,参芪地黄汤可通过减轻蛋白尿症状及微炎症状态,从而改善肾功能[4]。参芪地黄汤可降低糖尿病肾病大鼠模型肾组织中的TGF-β1、VEGF的表达水平而发挥抗糖尿病肾病的作用[5]。然而,加味参芪地黄汤由多味药组成,成分体系复杂,缺乏其活性成分的系统性研究。因此,明确加味参芪地黄汤中组分对进一步研究其药效作用意义重大。而中药复方具有成分体系复杂,这给分析分离带来了挑战。目前,超高效液相色谱技术联合质谱(Orbitrap-MS)已广泛应用于中药分析,Orbitrap-MS是静电场轨道阱高分辨质谱,其分辨率高,能够提供准确的分子量[6-8]。因此,本研究利用超高效液相色谱技术联合高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS)建立加味参芪地黄汤化学成分的鉴定分析方法,依据对照品、质谱碎片信息及文献报道,此外,采用软件Mass Frontier预测分析代表性成分的裂解途径,明确加味参芪地黄汤的化学成分组成,以期为研究该方药效物质基础提供依据。
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采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技术分析加味参芪地黄汤化学成分,在正、负离子模式下采集数据(图1),通过质谱软件Thermo Xcalibur 2.2 workstation分析可能的碎片信息,确定每个离子峰的质谱裂解规律,结合对照品及文献报道进行比对分析,从而进行化合物的鉴定。本次研究从加味参芪地黄汤共鉴定出62个化合物,包括13个芳香酸类、9个黄酮类、8个皂苷类成分、5个芳香胺类、3个酮酸类、2个酚类、1个芳香醌类及其他成分,具体结果见表1。
编号 化合物名称 tR(t/min) 分子式 理论值 实际值 离子模式 误差/ ×10−6 碎片离子信息(m/z) 1 1-脱氧-1-(甲氨基)己糖醇 0.73 C7H17NO5 195.10229 195.10977 [M-H]− −4.63 176.05,162.08,159.01 2 麝香木酚 0.75 C4H6N2O2 114.03455 114.04268 [M-H]− −2.13 85.03 3 戊糖酸 0.78 C5H10O6 166.03936 166.04721 [M-H]− −3.19 147.03 4 二甲基-4-羟色胺 0.81 C12H16N2O 204.13353 204.12674 [M+H]+ 2.34 204.17,188.11 5 氨己烯酸 0.82 C6H11NO2 129.08625 129.07919 [M+H]+ 1.68 84.04 6 美索卡因 0.83 C15H24N2O 248.19613 248.18908 [M+H]+ 0.85 221.05 7 丙二酸 1.09 C3H4O4 104.00258 104.01085 [M-H]− −1.00 102.02,93.60,59.01 8 L-焦谷氨酸 1.09 C5H7NO3 129.03421 129.04248 [M-H]− −0.89 120.07 9 琥珀酸 1.10 C4H6O4 118.01823 118.02643 [M-H]− −1.48 99.01,73.03 10 没食子酸 1.10 C7H6O5 170.01314 170.02101 [M-H]− −3.02 125.02 11 柠檬酸 1.15 C6H8O7 192.01862 192.02609 [M-H]− −4.75 173.01,111.01 12 2,5-二甲基-1,3-噁唑-4,4,5(5H)-三羧酸三甲酯 1.21 C11H15NO7 273.09212 273.08553 [M+H]+ 2.47 238.07,192.07,130.05,97.03 13 亚甲基琥珀酸 1.21 C5H6O4 130.018235 130.0264 [M-H]− −1.64 128.04 14 2-四氢糠酸 1.23 C5H4O3 111.00767 112.01584 [M-H]− −1.78 94.64 15 地黄苷D* 1.81 C27H42O20 686.22415 686.23109 [M-H]− 2.01 505.15 16 丁卡因 2.00 C15H24N2O2 264.19105 264.18419 [M+H]+ 1.56 247.18 17 5-羟甲基糠醛* 2.07 C6H6O3 126.03897 126.03532 [M+H]+ 3.50 109.03,81.03 18 联苯三酚 2.53 C6H6O3 126.03897 126.03207 [M+H]+ 2.97 109.03,81.03 19 N'-羟基-N-苯基辛二酰胺 3.37 C2H4N2O3 264.14684 264.14812 [M+H]+ 2.74 247.18 20 β-咔啉 3.51 C11H8N2 168.07602 168.06909 [M+H]+ 2.05 150.06 21 邻羟基苯甲酸 3.54 C7H6O3 138.03897 138.03186 [M+H]+ 1.22 111.04,83.05,79.02 22 紫丁香苷* 3.57 C17H24O9 372.13125 372.19681 [M+Na]+ −0.23 325.12,232.07 23 2-萘胺 3.59 C10H9N 143.08077 143.07369 [M+H]+ 1.31 143.03 24 党参皂苷 3.61 C29H42O18 677.23150 677.22874 [M-H]− 3.43 497.22,453.23 25 芹菜素-7-O-新橙皮糖苷 3.74 C27H30O14 578.17083 578.16403 [M+H]+ 0.82 285.08,270.05,253.05 26 已基-β-龙胆二糖苷 3.89 C18H34O11 426.20173 426.20035 [M-H]− −1.39 263.15,161.05 27 党参苷I 3.90 C21H26O12 470.13405 470.04950 [M-H]− −0.51 393.04,169.01 28 齐墩果酸 3.90 C30H48O3 456.36762 457.24234 [M+H]+ 0.48 385.19,295.19,277.18 29 四氰基对醌二甲烷 3.91 C12H4N4 204.05087 204.04263 [M+H]+ −4.71 146.06 30 香草醛 4.09 C8H8O3 152.05462 152.04759 [M+H]+ 1.64 143.03,125.02,79.02 31 党参炔苷* 4.12 C20H28O8 396.14238 396.14272 [M-H]− 0.36 395.09,305.10,215.12,185.09,159.09 32 乙酰对氨苯乙醚 4.18 C10H13NO2 179.101905 179.09498 [M+H]+ 1.93 179.06,175.03,162.09,138.09
120.08,112.0833 苯酰甲酸 4.43 C8H6O3 150.03897 150.03195 [M+H]+ 1.73 150.03,121.03,93.03 34 2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)-N-(2-硝基苯基)乙酰胺 4.52 C10H10N6O3 261.073064 262.08262 [M-H]− 4.53 231.07 35 槲皮素* 4.53 C15H10O7 302.04992 302.04283 [M+H]+ 0.60 195.03,167.07,149.06 36 5,7-二羟基-4'-甲氧基异黄酮 4.56 C16H12O5 284.07575 284.06860 [M+H]+ 0.46 270.05,255.07,227.07,175.04
151.04,123.0437 1-(2,4,6-三硝基苯基)-1H-苯并三唑 4.70 C12H6N6O6 330.02650 330.03575 [M-H]− 2.63 314.01 38 五碳醛糖基葡萄糖正己醇苷 4.88 C17H32O10 396.19117 396.19102 [M-H]− 4.43 349.20 39 N-(4-乙酰氨基苯基)-2-(1,3-二甲基-2,6-二氧代-1,2,3,6-四氢-7H-嘌呤-7-基)乙酰胺 4.94 C17H18N6O4 370.13057 370.13951 [M-H]− 1.50 207.10,161.02 40 高香草酸 5.03 C9H10O4 182.04953 182.05716 [M-H]− −4.13 166.03 41 创伤霉素 5.11 C12H20O3 212.14852 212.14143 [M+H]+ 0.88 141.00,105.04 42 黄芪甲苷 5.18 C41H68O14 784.45253 784.45117 [M-H]− 1.02 178.94,160.94,118.95 43 羟棕榈酰二氢鞘氨醇 5.19 C18H39NO2 302.30535 301.29842 [M+H]+ 1.12 286.05 44 2-[(二甲氨基)甲基]-1-(3-甲氧基苯基)-1-环己醇 5.34 C16H25NO2 263.19580 263.18913 [M+H]+ 2.30 177.13,88.08 45 7-(4-硝基苯基)-4-蝶啶胺 5.39 C12H8N6O2 268.06250 268.07213 [M-H]− 4.67 223.17 46 脱氨基神经氨酸 5.44 C9H16O9 268.07105 268.07811 [M-H]− −4.94 252.04 47 黄芪皂苷II 5.50 C43H70O15 826.46069 826.46179 [M+Na]+ 3.12 669.40,477.34 48 泽泻醇C-23-醋酸酯 5.62 C32H48O6 528.73178 528.72631 [M+H]+ 2.35 451.32 49 降木脂素 5.66 C17H18O5 302.12270 302.11595 [M+H]+ 1.75 167.07,149.06,133.06,123.04 50 茚三酮 6.04 C9H6O4 178.033885 178.02666 [M+H]+ 1.23 151.04,131.03 51 2-[3-(-2-四唑基)-1-金刚烷基]乙酰肼 6.05 C13H20N6O 276.16148 276.17109 [M-H]− 4.47 151.04 52 2,6-二甲基-4-(5-硝基-2-吡啶基)吗啉 6.36 C11H15N3O3 236.10296 237.11145 [M-H]− 0.45 192.11 53 茯苓新酸B* 7.14 C30H44O5 484.31050 484.32191 [M-H]− 0.75 465.02,409.03,365.03 54 泽泻醇B乙酸酯 7.99 C32H50O5 514.74113 514.76262 [M+H]+ 1.26 514.36 55 丹皮酚 8.10 C9H10O3 166.06103 166.05575 [M-H]− 3.52 122.03,108.02 56 二苯并-γ-吡喃酮 8.71 C13H8O2 196.04405 196.05165 [M-H]− −3.98 149.24 57 邻苯二甲酸酐 8.92 C8H4O3 148.02332 148.01593 [M+H]+ −0.76 147.80,121.03 58 双丁苯乙酸 9.35 C30H44O4 468.33123 468.32366 [M+H]+ −0.65 450.93 59 Codonopyrrolidium A 10.54 C19H28NO5 350.20402 350.21410 [M+H]+ 3.67 268.21 60 甲酪氨酸 10.58 C10H13NO3 195.08116 195.08867 [M-H]− −4.49 145.24 61 非尼戊醇 10.70 C11H16O 164.11174 164.11961 [M-H]− −3.07 152.04 62 1-{1-[1-(2-甲氧基乙基)-1H-四唑-5-基]戊基}-4-甲基哌嗪 11.98 C14H28N6O 296.224086 296.23344 [M-H]− 3.32 277.22,195.14 注:*表示该化合物由对照品进行指认。 -
黄酮类化合物具有抗炎、抗肿瘤活性,研究发现其具有良好的抗糖尿病肾病的作用[9-10]。本次研究采用UPLC–LTQ–Orbitrap MS共鉴定出9个黄酮类成分。以化合物35为例分析黄酮类化合物的裂解规律,化合物35在正离子模式下,形成准分子离子峰[M+H]+ m/z 303.04283,该离子峰进行碰撞诱导解离,进而色原酮母核发生i裂解,失去-C7H6O4形成m/z 149.06碎片峰,此外,准分子离子峰[M+H]+ m/z 303.04283色原酮母核可直接裂解失去-C6H6O2,形成m/z 195.03碎片峰,进而失去-CO,形成m/z 167.07碎片峰,结合对照品比对,化合物35鉴定为槲皮素,其可能的质谱裂解途径见图2。
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炔类化合物是党参中重要的活性成分,本次鉴定出党参中党参炔苷这一化合物,文献报道显示其具有抗炎、抗氧化的活性[11]。根据多级碎片信息,为其他炔类的裂解规律提供依据。31号峰在HCD碰撞模式下,形成准分子离子峰[M-H]− m/z 395.09272,该离子峰进行碰撞诱导解离,失去侧链的炔基-C7H6,形成碎片峰m/z 305.10,有碎片离子m/z 215.12,与准分子离子峰分子量相差179 Da,推测可能丢失1个葡萄糖基,失去-C6H11O6,形成碎片峰m/z 215.12,进一步失去侧链的CH2O、C2H4形成碎片峰m/z 185.09和m/z 159.09,结合对照品比对,化合物31鉴定为党参炔苷,其可能的质谱裂解途径见图3。
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糠醛类化合物具有抗氧化、改善学习记忆、抗过敏、抗炎症反应等作用[12]。17号峰在HCD碰撞模式下,形成准分子离子峰[M+H]+ m/z 127.03532该离子峰,进而进行碰撞诱导解离,失去侧链的-H2O,形成m/z 109.03碎片峰,进一步失去侧链-CO,最终保留呋喃母核结构,形成碎m/z 81.03片峰,结合文献报道[13]和对照品比对,17号化合物鉴定为5-羟甲基糠醛,其可能的质谱裂解途径见图4。
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三萜类化合物是茯苓中重要的活性成分,研究发现其对慢性肾小球肾炎具有保护作用[14]。本次鉴定出茯苓新酸B为三萜类化合物,分析其裂解规律。53号峰在HCD碰撞模式下,形成准分子离子峰[M-H]− m/z 483.32191,该离子峰进一步裂解形成的碎片峰有m/z 465.02、m/z 409.03、m/z 365.03,根据其化学结构和二级碎片信息,推断m/z 465.02离子碎片峰是由准分子离子峰[M-H]− m/z 483.32191,裂解失去-H2O所形成,m/z 409.03碎片峰是由准分子离子峰[M-H]− m/z 483.32191失去1个侧链的丙酸基-C3H6O2所形成的,而m/z 365.03离子碎片峰是由m/z 409.03碎片峰进一步失去1分子CO2所形成。结合文献报道[15]和对照品比对,化合物53鉴定为茯苓新酸B,其可能的质谱裂解途径见图5。
Analysis of chemical ingredients of modified Shenqi Dihuang decoction by UPLC-LTQ-Orbitrap-MS
doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202112054
- Received Date: 2021-12-19
- Rev Recd Date: 2022-03-11
- Available Online: 2023-11-06
- Publish Date: 2022-05-25
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Key words:
- Shenqi Dihuang decoction /
- chemical constituents /
- ultra performance liquid chromatography-ion trap-electrostatic field orbitrap mass spectrometry
Abstract:
Citation: | WAN Zhong, LIU Wangzhenzu, TAN Mingyue, XU Dongliang, HU Cheng, JI Wanli. Analysis of chemical ingredients of modified Shenqi Dihuang decoction by UPLC-LTQ-Orbitrap-MS[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(3): 231-237, 264. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202112054 |