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陈香露白露片的处方由陈皮、甘草、川木香、大黄、石菖蒲五味中药和碳酸镁、氧化镁、次硝酸铋、碳酸氢钠4种化学药组成[1]。方中陈皮行脾胃之气[2,3],为君药,主要活性成分为橙皮苷、川陈皮素、橘皮素,与甘草配伍,健脾祛湿[4];甘草苷、甘草酸铵为甘草的主要活性成分;川木香具行气止痛之效[5],广泛用于腹痛,食欲不振等,木香烃内酯、去氢木香内酯为其主要活性成分。加之碳酸氢钠等碱性药物中和胃酸[6],共成健胃和中、理气止痛功效。
陈香露白露片目前执行的质量标准为《卫生部药品标准WS3-B-1553-93》,该标准仅设置了化学药成分的质量控制参数,难以全面反映产品质量,存在较大的安全风险。为实现陈香露白露片内在质量的有效控制,本实验构建了同步测定陈香露白露片中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、橘皮素、川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯等7种特征活性成分含量的HPLC方法。该研究不仅为提高该制剂质量提供了有效、可靠的分析方法,同时对药品安全风险评估的有效实施也具有重要的研究意义。
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采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相A为甲醇,流动相B为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱(0~8 min,15% A;8~35 min,15% A→50% A;35~50 min,50% A;50~65 min,50% A→80% A;65~66 min,80% A→15% A;66~75 min,15% A),流速1.0 ml/min,柱温35 ℃,进样量10 μl,检测波长237 nm(0~15 min,检测甘草苷)、283 nm(15~25 min,检测橙皮苷)、237 nm(25~34 min,检测甘草酸铵)、330 nm(34~45 min,检测川陈皮素、橘皮素)、237 nm(45~75 min,检测去氢木香内酯、木香烃内酯)。
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取甘草苷、橙皮苷、甘草酸铵、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯对照品适量,精密称定,用50%甲醇配制成浓度分别为55.72、1108、307.2、56.25、18.75、26.01、58.95 μg/ml的混合对照溶液。
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取陈香露白露片样品,研细,精密称取约1 g,置于锥形瓶中,精密加入25 ml 50%甲醇,超声30 min(功率250 W,频率33 kHz),放冷,精密称定,用50%甲醇补充损失的重量,摇匀,0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
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分别按陈香露白露片处方中各药比例制备缺陈皮、甘草、川木香的阴性样品,并按“2.2.2”项下方法制成缺陈皮、甘草、川木香的阴性供试品溶液。
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对照品溶液、供试品溶液及缺陈皮、甘草、川木香的阴性供试品溶液按“2.1”项下色谱条件进行测定分析。结果如图1所示,甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯等7种成分与相邻峰分离良好,分离度均大于1.5;阴性样品中其他成分色谱峰均未对7种成分产生干扰,表明该分析方法专属性良好。
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精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液0.10、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00 ml置于5 ml容量瓶中,用50%甲醇稀释,制备6个浓度的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件进行测定,并绘制标准曲线,其中横坐标为对照品的浓度(X,μg/ml),纵坐标为峰面积(Y)。7种成分线性范围、线性回归方程与相关系数见表1。结果显示,7种成分分别在各自浓度范围内线性关系良好。
成分 线性范围(μg/ml) 回归方程 r 甘草苷 1.110~55.72 Y=17125X+155.53 0.9992 橙皮苷 22.15~1108 Y =5784.3X+7.1165 0.9995 甘草酸铵 6.140~307.2 Y =15716X+375.13 0.9999 川陈皮素 1.130~56.25 Y =21135X+32.117 0.9997 橘皮素 0.3700~18.75 Y =20148X+72.316 0.9982 木香烃内酯 0.5200~26.01 Y=21432X+4.1189 0.9991 去氢木香内酯 1.180~58.95 Y=15235X-135.15 0.9999 -
取“2.2.1”项下对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件重复测定6次。结果显示甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积6次测定结果的RSD分别为0.37%、0.38%、0.39%、0.42%、0.48%、0.75%、0.67%,表明该仪器精密度良好。
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按“2.2.2”项下方法平行制备6份陈香露白露片(批号:20210105)供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果显示甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯的含量依次分别为1.158、4.002、10.68、0.0633、0.1477、0.1323、0.2927 mg/g,其RSD分别为0.62%、0.65%、0.64%、1.05%、1.62%、0.87%、1.28%,表明该方法重复性良好。
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取同一供试品溶液(批号:20210105),放置 0、4、8、12、16、20、24 h后,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果显示甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD依次分别为0.54%、0.68%、0.72%、1.02%、0.85%、1.60%、1.32%,表明该供试品溶液在24 h内具有良好的稳定性。
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取已知含量的陈香露白露片(批号:20210111)9份,每份约0.5 g,精密称定,基于样品中7种成分的含量分别按低、中、高3种浓度水平加入对照品溶液(每个浓度各3份),按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,并按“2.1”项下色谱条件进行测定,结果显示7种成分的回收率分别为98.71%、98.12%、98.44%、98.22%、99.17%、99.18%、97.93%,RSD分别为0.16%、0.67%、0.57%、0.62%、0.48%、0.56%、0.58%,表明该方法准确性高。
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取16批陈香露白露片样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,并在“2.1”项下色谱条件测定样品。外标法计算16批次样品中7种成分的含量,结果见表2。结果显示16批样品中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯的含量分别为0.1250~1.174、2.354~7.426、1.822~27.21、0.0370~1.399、0.0723~0.4433、0.0140~0.1990、0.2207~1.407 mg/g。
批号 甘草苷 橙皮苷 甘草酸铵 川陈皮素 橘皮素 木香烃内酯 去氢木香内酯 201207 0.5967 1.822 2.354 0.0847 0.1840 0.1990 0.9440 190202 0.6090 3.513 3.413 1.399 0.2773 0.0487 1.407 200506 1.053 9.611 3.643 0.351 0.0723 0.0140 0.4123 210106 0.6203 3.634 2.682 0.0433 0.0930 0.0673 0.2647 210107 0.6433 3.855 2.761 0.0480 0.2883 0.0460 0.2207 210110 0.2047 3.034 2.689 0.3313 0.1237 0.0993 0.2907 201102 0.6677 5.209 2.613 0.1530 0.2897 0.0417 0.4200 20191211 1.107 6.832 3.724 0.4360 0.0843 0.0180 0.2243 20210105 1.158 10.68 4.002 0.0633 0.1477 0.1323 0.2927 20210111 1.174 9.624 3.971 0.0370 0.0830 0.1857 0.8773 20201212 1.085 9.204 3.860 0.0993 0.2333 0.1890 0.4257 20201001 1.055 10.333 3.682 0.8917 0.1937 0.1023 1.293 200902 0.747 8.085 2.947 0.9430 0.2137 0.0870 1.326 200901 0.8807 27.21 3.080 1.044 0.2270 0.1263 0.5503 201202 0.5473 5.573 2.584 1.144 0.2437 0.1280 0.3333 200601 0.1250 5.374 7.426 0.0883 0.4433 0.0650 0.3890
Simultaneous determination of seven constituents in Chenxiang Lubailu tablet by HPLC
doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202202038
- Received Date: 2022-02-16
- Rev Recd Date: 2022-05-30
- Available Online: 2022-11-28
- Publish Date: 2022-11-25
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Key words:
- HPLC /
- Chenxiang Lubailu tablet /
- liquiritin /
- ammonium glycyrrhizinate /
- hesperidin /
- nobiletin /
- tangeretin /
- costunolide /
- dehydrocostuslactone
Abstract:
Citation: | ZHANG Lu, DAI Qunfang, CHEN Sisi. Simultaneous determination of seven constituents in Chenxiang Lubailu tablet by HPLC[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 553-556, 570. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202202038 |