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肝苏颗粒是由苗药赶黄草(Penthorum chinense Pursh)加工制成的单方制剂,1998年被列为基本药物,在临床上主要用于治疗酒精性肝损伤、慢性乙型肝炎等疾病[1],目前收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十三册》(下称《部颁标准》)[2]。近年来对肝苏颗粒的研究主要集中于药理与临床研究,药理研究表明肝苏颗粒对CCl4致化学性、胆管阻塞性和免疫性大鼠肝纤维化模型均有治疗作用,可明显抑制肝脏脂质过氧化损伤,改善肝功能和减轻肝脏纤维化[2-4];临床上,明确了采用肝苏颗粒联合西药共同作用,在治疗慢性乙型肝炎、保肝降酶、退黄上均具有高于单用西药的治疗效果[5-8],但对其制剂质量控制的研究较少,鉴于《部颁标准》发布时间久远,随着研究进展及分析技术与设备的进步,应制定更为科学、完善的标准,以保证制剂稳定、临床用药安全。
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取肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取1.0 g,精密称定,精密加入10 ml 80%甲醇,称定重量,超声提取15 min(功率350 W,频率53 kHz),取出放至室温,用80%甲醇补足失重,摇匀,过0.45 µm微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷标准品适量,精密称定,置于容量瓶,加入80%甲醇定容至刻度线,制成每1 ml含乔松苷1 mg的标准品溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液5 µl、对照品溶液2 µl,分别点于同一高效硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以5%三氯化铝乙醇溶液,晾干,热风吹至斑点显色清晰,置紫外光(365 nm)下检视。根据图1显示,供试品色谱与对照品色谱中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在相同位置显示相同颜色斑点。
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色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B);梯度洗脱:0~10 min,28%→30% A;10~17.5 min,30%→ 34.5% A;17.5~20 min,34.5%→90% A;检测波长:280 nm(紫外检测时间20 min);柱温:30 ℃;流速:1.0ml/min;进样量:10 μl。
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取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,精密称定,加80%甲醇制成质量浓度分别为0.24 mg/ml的对照品储备液。
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取肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取粉末1.0 g,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入25 ml 80%甲醇溶液,称定重量,超声处理15 min,取出放至室温,用80%甲醇补足失重,摇匀,取样过0.45 μm微孔滤膜,取续滤液即得。
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取提取溶剂80%甲醇与对照品储备液、样品溶液,按上述色谱条件进样10 µl,记录色谱图,结果见图2。根据结果,乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷分离效果良好,分离度大于1.5,理论塔板数不低于7700。
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量取对照品储备液(240µg/ml)适量,依次用80%甲醇稀释成240、120、60、24、4.8、2.4µg/ml,以进样质量为横坐标 (X) ,峰面积为纵坐标 (Y) 进行回归,得乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线为:Y=2323.5748X+2.0537,r= 0.9999,表明乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在2.4~240 µg/ml范围内线性关系良好。
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精密吸取对照品溶液(240µg/ml)10µl,在上述液相色谱条件下连续进样6次,测定峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积RSD为0.13%,表明仪器精密度良好。
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取肝苏颗粒(GSKL-10),按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液6份,测定峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰的平均峰面积为1789.29,RSD为2.12%,表明该方法重复性良好。
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取肝苏颗粒(GSKL-10),按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,并按“2.2.1”项下色谱条件,分别于0、4、8、12、24 h进样,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均峰面积为1788.29,RSD为0.67%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
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分别称取肝苏颗粒(GSKL-10)6份已知含量的样品约0.5 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,按照接近 1∶1 的量计算所需添加的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液,加入到样品中,按“2.2.3”项下方法平行制成6份供试品溶液,进样 10 μl,记录峰面积,结果显示乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率为100.76%,RSD 为 0.66%,说明该方法准确度较好,计算结果见表1。
样品
编号样品中含量
(mg)加入量
(mg)测得总量
(mg)回收率
(%)平均回收率
(%)RSD
(%)GSKL-10 0.96 0.95 1.9306 102.17 100.76 0.66 0.95 1.9102 100.02 0.95 1.9146 100.48 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9162 100.65 0.95 1.9156 100.59 -
分别取每批肝苏颗粒适量,研细(过3号筛),取粉末1.0 g,精密称定,按“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液,每批样品平行制备2份,每份进样3次,进样量10 μl,记录峰面积,计算乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量,结果见表2。
样品编号 含量(mg/袋) GSKL-1 17.87±0.13 GSKL-2 19.02±0.07 GSKL-3 19.19±0.40 GSKL-4 18.67±0.14 GSKL-5 18.37±0.07 GSKL-6 18.84±0.08 GSKL-7 18.00±0.01 GSKL-8 15.99±0.02 GSKL-9 17.17±0.01 GSKL-10 17.31±0.03 GSKL-11 17.50±0.02 GSKL-12 20.93±0.16 GSKL-13 20.12±0.16 GSKL-14 15.30±0.06 GSKL-15 17.46±0.08
Study on quality standard improvement for Gansu granules
doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061
- Received Date: 2022-07-18
- Rev Recd Date: 2022-09-06
- Available Online: 2022-11-28
- Publish Date: 2022-11-25
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Key words:
- Gansu granules /
- quality standards /
- TLC /
- pinocembrin-7-O-β-D-glucoside /
- HPLC
Abstract:
Citation: | TAO Chaoyang, SHI Pengjie, ZHOU Xin, SUN Lianna. Study on quality standard improvement for Gansu granules[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(6): 546-549. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202207061 |