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Volume 42 Issue 9
Sep.  2024
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Article Navigation >  Journal of Pharmaceutical Practice and Service  > 2024  >  42(9): 379-384, 410

CHEN Bingchen, WANG Sizhen, GUO Beibei, YANG Feng. Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(9): 379-384, 410. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
Citation: CHEN Bingchen, WANG Sizhen, GUO Beibei, YANG Feng. Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(9): 379-384, 410. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
shu

Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
  • a.

    Department of Colorectal Surgery, The First Affiliated Hospital, Naval Medical University

  • b.

    Department of Inorganic Chemistry, School of Pharmacy, Naval Medical University, Shanghai 200433, China

  • Received Date: 2024-04-17
  • Rev Recd Date: 2024-07-18
    • Available Online: 2024-09-20
  • Publish Date: 2024-09-25
  •   Objective  To improve the cellular uptake efficiency and the therapeutic effect through the structural modification of paclitaxel （PTX） and the preparation of corresponding liposomes.   Methods  The prodrug of paclitaxel, PTX-PA, was prepared by esterification reaction, and the quantitative detection method of PTX-PA was established. Next,the optimal formulation and preparation of PTX-PA/Lip was obtained through single factor screening based on their appearance, particle size, and encapsulation efficiency.   Results  The PTX-PA was successfully synthesized, and the established HPLC quantitative analysis method for PTX-PA met the methodological requirements. After the optimal preparation and formulation research through single factor screening, the particle size of optimized PTX-PA/Lip was （62.75±1.81） nm with a PDI of （0.076±0.02）, while the drug encapsulation rate reached more than 90%.   Conclusion  This research successfully prepared palmitic acid modified paclitaxel liposomes based on nanotechnology, enhancing the drug delivery efficiency of paclitaxel and laying the foundation for the pharmacodynamics research of PTX-PA.
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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
  • 1. 

    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes

doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
  • a. Department of Colorectal Surgery, The First Affiliated Hospital, Naval Medical University
  • b. Department of Inorganic Chemistry, School of Pharmacy, Naval Medical University, Shanghai 200433, China
  • Received Date: 2024-04-17
  • Rev Recd Date: 2024-07-18
  • Available Online: 2024-09-20
  • Publish Date: 2024-09-25

Abstract:   Objective  To improve the cellular uptake efficiency and the therapeutic effect through the structural modification of paclitaxel （PTX） and the preparation of corresponding liposomes.   Methods  The prodrug of paclitaxel, PTX-PA, was prepared by esterification reaction, and the quantitative detection method of PTX-PA was established. Next,the optimal formulation and preparation of PTX-PA/Lip was obtained through single factor screening based on their appearance, particle size, and encapsulation efficiency.   Results  The PTX-PA was successfully synthesized, and the established HPLC quantitative analysis method for PTX-PA met the methodological requirements. After the optimal preparation and formulation research through single factor screening, the particle size of optimized PTX-PA/Lip was （62.75±1.81） nm with a PDI of （0.076±0.02）, while the drug encapsulation rate reached more than 90%.   Conclusion  This research successfully prepared palmitic acid modified paclitaxel liposomes based on nanotechnology, enhancing the drug delivery efficiency of paclitaxel and laying the foundation for the pharmacodynamics research of PTX-PA.

CHEN Bingchen, WANG Sizhen, GUO Beibei, YANG Feng. Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(9): 379-384, 410. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
Citation: CHEN Bingchen, WANG Sizhen, GUO Beibei, YANG Feng. Synthesis of paclitaxel palmitate and the formulation optimization of its liposomes[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2024, 42(9): 379-384, 410. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404062
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  • 结直肠癌（CC）发生率占所有肿瘤发生率的第3位，病死率仅次于肺癌，属于下消化系统恶性肿瘤[1]。目前，结肠癌的治疗主要采用多学科的综合治疗模式[2]。包括5-氟尿嘧啶、奥沙利铂与贝伐珠单抗等的组合[3-5]。然而，这些常规的化疗方案可能造成患者不耐受以及骨髓等的抑制。因此，寻找新的有效的药物对于现今结肠癌治疗具有重要意义。

    紫杉醇（PTX）是一种广谱抗肿瘤活性的化疗药物，来源于太平洋紫杉树皮（红豆杉）[6,7]。临床试验结果表明，PTX在几种癌症治疗中有较好的活性，包括：乳腺癌、皮肤恶性肿瘤、非小细胞肺癌以及卵巢癌等[8,9]。然而，由于结肠癌中过表达的P糖蛋白（P-gp）引起了多重耐药性（MDR），导致PTX对结肠癌临床治疗效果不甚理想[10]。此外，PTX生物半衰期短，其一代药物Taxol以聚氧乙烯蓖麻油为表面活性剂，具有引起患者过敏反应的风险，从而限制了PTX临床疗效的发挥[11]。因此，迫切需要对PTX进行结构改进与剂型设计，改善其药物递送效率，提高生物利用度[12]。

    脂肪酸作为生物膜和生物信号分子的重要成分，参与了细胞能量产生、代谢的过程。由于肿瘤细胞增殖快速，需要大量的细胞合成物质和能量的供应，因此，患有恶性肿瘤的患者其脂肪酸合成也较快。其中，肿瘤细胞因为迅速繁殖对含有16个碳原子的棕榈酸（PA）为主的脂肪酸需求量大，因此利用PA进行修饰有利于药物被肿瘤细胞摄取[13,14]。再者，研究发现，由PA修饰的紫杉醇，能降低其对P-gp的亲和力，避免了PTX进入肿瘤细胞后的外排，提高紫杉醇对于结肠癌治疗的有效性[15]。

    此外，作为一种成熟的药物载体，脂质体（Lip）在体内可被降解、无毒性和免疫原性，能够增强药物在体内的稳定性，从而可以减少给药剂量、降低毒副作用，并且其表面具有可修饰性[16]，例如，采用聚乙二醇磷脂（PEG-DSPE）修饰的脂质体因其空间位阻效应可延长其在体内的循环时间[17]。同时结合肿瘤组织的增强通透性和滞留效应（EPR），使药物通过被动靶向递送到靶部位[18]。

    结合以上背景，本研究首先通过棕榈酸酯与紫杉醇共价键结合构建紫杉醇棕榈酸酯（PTX-PA），并建立基于高效液相（HPLC）的定量分析方法，旨在降低其对P-gp的亲和力，避免PTX进入肿瘤细胞后被外排，从而改善紫杉醇毒性较大、生物半衰期短、成药性差等问题，提高紫杉醇对于结肠癌治疗的有效性。其次，我们将PTX-PA包载进PEG修饰的脂质体构建紫杉醇棕榈酸酯的脂质体（PTX-PA/Lip），以实现其长循环，增加PTX的疗效、降低其毒副作用。最后，采用工艺筛选与单因素处方优化的方法制备最佳PTX-PA/Lip，为PTX-PA的制剂学研究奠定基础[19]。

    • 1.   仪器与材料

      1.1.   仪器

    • 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司，美国）；十万分之一电子天平（MS105DU，梅特勒托利多公司，瑞士）；超滤管（30 kD，密理博公司，美国）；低温高速离心机（Eppendorf-200，艾本德公司，德国）；高压均质机（NanoGenizer，美国）；Zeta-sizer Nano粒度仪（Nano-ZS，马尔文公司，英国）。

      • 1.2.   试剂与材料

    • 紫杉醇购自江苏红豆杉生物科技股份有限公司，纯度≥98%；棕榈酸购自中国医药集团上海化学试剂公司，纯度≥99%；蛋黄卵磷脂（PC98-T）、胆固醇、DSPE-PEG 2000均购自上海艾韦特医药科技有限公司；1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）、乙酸乙酯、二氯甲烷、无水乙醇、石油醚均购自中国医药集团上海化学试剂公司，分析纯；乙酸乙酯、PC-98T蛋黄卵磷脂（上海艾韦特医药科技有限公司）；胆固醇（上海艾韦特医药科技有限公司）；二氯甲烷、DSPE-PEG 2000（上海艾韦特医药科技有限公司）；无水乙醇、石油醚购自中国医药集团上海化学试剂公司；甲醇购自美国默克公司，色谱纯。

    2.   方法

      2.1.   PTX-PA的制备与纯化

    • PTX-PA前药由PTX与PA发生酯化反应合成，其合成过程如下[20,21]：精密称取PTX 0.85 g，加入无水二氯甲烷 30 ml。依次加入精密称取的EDC 0.19 g、DMAP 0.15 g和PA 0.31 g，在氮气保护下室温搅拌反应12 h。反应结束后，用5%柠檬酸水溶液、饱和食盐水洗涤3遍，旋蒸除去有机溶剂，即得PTX-PA粗品。采用石油醚和乙酸乙酯通过柱层析法对PTX-PA进行分离、纯化。洗脱完成后，将产物旋蒸去除有机溶剂，得到的白色固体即为PTX-PA，样品经核磁共振氢谱、碳谱确定为PTX-PA，样品纯度98.5%。

      • 2.2.   基于HPLC定量检测的方法学建立[22]

      2.2.1.   最大吸收波长测定与色谱条件设定

    • 精密取适量的PTX-PA粉末，采用甲醇溶解，定容，通过全波长（190~400 nm）扫描测定其紫外最大吸收波长λmax。

      本实验采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相采用甲醇/水（95∶5，V/V），进样量20 μl，流速1.0 ml/min。

      • 2.2.2.   样品溶液配制

    • 空白溶液的配制：精密量取不含药的空白脂质体1 ml加入适量的甲醇溶液，超声，用甲醇定容至25 ml，0.45 μm的微孔滤膜过滤，滤液即为空白溶液。

      对照品溶液的配制：精密称取PTX-PA 粉末50 mg，用甲醇溶解并定容至50 ml，过滤，即得PTX-PA对照品储备溶液。

      供试品溶液的配制：精密量取1 ml PTX-PA/Lip，加入适量甲醇溶解、超声破乳、定容至25 ml，过滤，滤液即为供试品溶液。

      • 2.2.3.   专属性考察

    • 分别取适量空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，用流动相稀释至适当的浓度后，按照“色谱条件”中建立的高相液相参数进行进样分析。

      • 2.2.4.   线性关系考察

    • 精密量取适量PTX-PA对照品储备液依次稀释为浓度1、5、10、25、50、100 μg/ml的PTX-PA系列浓度。按照“色谱条件”中的高效液相参数进行进样分析（n=5），并记录不同浓度的PTX-PA的色谱峰面积。以浓度（C）为X轴、峰面积（A）为Y轴进行回归。

      • 2.2.5.   精密度考察

    • 日内精密度考察：精密吸取3种不同浓度（5、25、100 μg/ml）的 PTX-PA对照品溶液，对同一浓度溶液连续进样5次，每次10 µl，按照“2.2.1”项下色谱条件进行分析，记录各个浓度吸收峰面积。

      日间精密度考察：精密吸取3种不同浓度（5、25、100 μg/ml）的 PTX-PA对照品溶液，对同一浓度溶液连续进样5 d，每天1次，每次10 µl，按照“2.2.1”项下色谱条件进行分析，记录第0、1、2、3、4天的吸收峰面积，计算样品浓度，考察仪器的日间精密度。

      • 2.2.6.   重复性与稳定性

    • 空白脂质体超声破乳，配制成3种不同浓度（1、10、100 μg/ml），连续进样5次，每次10 µl，记录各吸收峰面积，考察重复性。精密吸取浓度为50 μg/ml的 PTX-PA供试品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，每次进样10 µl，记录各紫外吸收峰面积，考察样品的稳定性。

      • 2.2.7.   加样回收率考察

    • 空白脂质体超声破乳，分别加入浓度为1 mg/ml的PTX-PA溶液0.5、2.5、5 ml，采用流动相稀释定容至100 ml，分别进样，并结合PTX-PA的理论浓度（5、25、50 μg/ml）进行加样回收率的计算与分析。

      • 2.3.   紫杉醇棕榈酸酯脂质体PTX-PA/Lip的制备

      2.3.1.   PTX-PA/Lip的制备方法的选择

    • （1） 薄膜分散法

      精密称取PTX-PA 20 mg、蛋黄卵磷脂350 mg、胆固醇5 mg和DSPE-PEG2000 25 mg，加入适量的二氯甲烷使其充分溶解。然后旋蒸除去有机溶剂，使圆底烧瓶底部形成一层均匀透明的薄膜，再加入预热至同等温度的重蒸水10 ml，震荡、水化，得PTX-PA/Lip粗品。将得到的粗品经探头超声（1 min）、过滤处理后，即得PTX-PA/Lip纳米给药系统[19]。

      （2） 高压均质法

      将薄膜分散法制得的PTX-PA/Lip粗品置于高压均质机中，经3次均质处理后（均质压力12 000 psi），即得PTX-PA/Lip纳米给药系统[23,24]。

      （3）挤出法

      将薄膜分散法制得的PTX-PA/Lip粗品置于挤出器中，使分别经过孔径为0.2、0.1、0.05 μm的聚碳酸酯膜，即得PTX-PA/Lip纳米给药系统[25-27]。

      • 2.3.2.   处方工艺筛选

    • （1）磷脂种类的选择

      采用薄膜分散法考察不同磷脂制备的PTX-PA/Lip，包括：氢化磷脂（HSPC）、蛋黄卵磷脂（PC98-T）、蛋黄磷脂（EPCS）、二棕榈酸磷脂酰胆碱（DPPC），以形态、粒径、包封率为指标进行评价。

      （2）磷脂和药物/胆固醇比例的考察

      分别以磷脂和药物的质量比（5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、40∶1）/PC98-T和胆固醇的质量比（4∶0.05、4∶0.1、4∶0.2、4∶0.3、4∶0.4、4∶0.5）为自变量制备PTX-PA/Lip脂质体，考察不同处方的粒径、粒径分布、包封率，确定处方中磷脂与药物/胆固醇的质量比。

      （3）药物和DSPE-PEG2000比例的考察

      以PTX-PA和DSPE-PEG2000的质量比（1∶0.5、1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5）为自变量，考察其用量对制剂的外观澄明度、纳米粒子大小等是否产生影响。

      （4）薄膜蒸发法的温度考察

      将旋转蒸发仪温度分别设置为35、40、45、50、55 ℃，考察薄膜蒸发过程中温度对PTX-PA/Lip形态、粒径、包封率等的影响。

      （5）探头超声时间的考察

      以探头超声PTX-PA/Lip粗品的时间为自变量，考察不同超声时间（30、60、90、180、240 s）对PTX-PA/Lip纳米制剂形态、纳米粒子大小的影响。

      • 2.4.   统计学分析

    • 数据采用IBM SPSS Statistics 27.0进行统计分析，采用单因素方差分析ANOVA进行显著性检验与评价。

    3.   结果与讨论

      3.1.   基于PTX-PA的HPLC定量检测方法学建立

      3.1.1.   最大吸收波长的选择

    • 实验结果如图1所示，选用PTX-PA的最大吸收波长为228 nm为测定波长。

      • 3.1.2.   专属性考察

    • 如图2所示，本章所建立的色谱条件对PTX-PA检测具有专属性，溶剂以及样品中的辅料对PTX-PA的检测不产生干扰。

      • 3.1.3.   线性关系考察

    • 按照2.2.4方法进行回归，得PTX-PA的吸收峰面积-浓度在1~100 μg/ml的浓度范围内为线性方程：A=15.14 C+10.81（r=0.999 8）。

      • 3.1.4.   精密度考察

    • 按照2.2.5方法进行精密度考察，结果如表1所示，日内与日间精密度各时间点峰面积的RSD均小于3%，表明仪器的日内与日间精密度符合测定要求。

      理论浓度（μg/ml） 实测浓度（μg/ml） RSD（%）
      日内 5.00 4.98±0.13 2.65
      25.00 25.30±0.55 2.18
      100.00 99.66±1.11 1.11
      日间 5.00 4.99±0.11 2.31
      25.00 25.50±0.57 2.23
      100.00 100.65±1.38 1.37
      • 3.1.5.   重复性与稳定性

    • 按照2.2.6方法进行研究，精密吸取3种不同浓度的 PTX-PA溶液，连续进样5次并记录各吸收峰面积。各浓度峰面积RSD均<3%，表明仪器符合检测检测要求。此外，稳定性结果表明，样品溶液峰面积的RSD为0.81%，表明制备的PTX-PA溶液在24 h内稳定。

      • 3.1.6.   加样回收率

    • 按照2.2.7方法计算加样回收率，结果如表2所示：低、中、高3个浓度的加样回收率均在95%~105%之间，且RSD分别为2.39%、1.80%、2.34%，表明本实验建立的高效液相色谱定量方法可用于PTX-PA的含量测定。

      理论浓度（μg/ml）检测浓度（μg/ml）回收率（%）RSD（%）
      55.02±0.12100.42.39
      2524.98±0.4599.921.80
      5050.01±1.17100.022.34

      • 3.2.   紫杉醇棕榈酸酯脂质体的制备及处方优化

      3.2.1.   PTX-PA/Lip制备方法的选择

    • 采用不同方法制备的PTX-PA/Lip表征结果如表3所示，按照2.4方法进行统计学分析，3种制备方法的包封率无显著性差异，但采用薄膜分散法制备的PTX-PA/Lip粒径与PDI更小。因此，本研究优选薄膜分散法来构建PTX-PA/Lip。

      制备方法 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      薄膜分散法 76.76±3.39 0.104±0.02 79.38±2.00
      高压均值法 125.11±5.32 0.139±0.03 78.87±2.00
      挤出法 128.87±4.92 0.239±0.05 81.38±1.11
      • 3.2.2.   处方工艺筛选

    • （1）磷脂种类的选择

      按照2.3.2（1）制备的PTX-PA/Lip表征结果如表4所示，以PC98-T为膜材制备的纳米给药系统粒径小、外观澄明、粒径分布均匀、包封率较高，因此选择PC98-T作为本研究中的磷脂。

      磷脂种类 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      PC98-T 半透明 76.76±3.39 0.104±0.02 79.38±2.00
      HSPC 有沉淀 177.86±5.39 0.532±0.08 59.06±1.32
      EPCS 半透明 135.12±5.65 0.108±0.03 73.23±1.15
      DPPC 有沉淀 158.26±4.11 0.669±0.05 53.27±2.68

      （2）磷脂和药物比例的考察

      按照2.3.2（2）项下确定处方中药物和磷脂的用量，其结果如表5所示，磷脂PC98-T和药物的质量比大于10时，制备的PTX-PA/Lip外观澄明度、粒子大小、粒径分散系数等参数无显著性差别。随着磷脂浓度不断增加，药物的包封率不断增加，当PC98-T和PTX-PA的质量比为20∶1时，脂质体对药物的包封率最高，后期考虑到经济成本，将PC98-T和PTX-PA的质量比定为20∶1。

      磷脂∶药物 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      5∶1 略透明 134.62±2.95 0.364±0.04 58.15±1.73
      10∶1 有沉淀 90.29±4.66 0.151±0.04 71.56±1.60
      20∶1 半透明 84.58±1.33 0.11±0.02 83.50±0.92
      30∶1 半透明 86.06±2.71 0.09±0.05 73.44±4.44
      40∶1 有沉淀 88.86±1.91 0.199±0.05 68.37±11.08

      （3）磷脂和胆固醇比例的考察

      按照2.3.2（2）方法研究，结果如表6所示，随着胆固醇用量增多，制剂变浑浊，粒径增大，载药量显著降低。因此，胆固醇不加入本制剂的处方中。

      磷脂∶胆固醇 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      4∶0.05 半透明 115.37±4.48 0.200±0.07 71.57±1.28
      4∶0.1 半透明 160.16±3.15 0.251±0.01 61.08±3.13
      4∶0.2 半透明 182.75±2.43 0.217±0.04 54.97±0.95
      4∶0.3 乳白色 241.90±12.09 0.697±0.12 54.11±1.64
      4∶0.4 乳白色 255.33±8.27 0.700±0.138 48.84±0.78

      （4）药物和DSPE-PEG2000比例的考察

      按照2.3.2（3）方法研究，其结果如表7所示，DSPE-PEG2000对包封率没有显著性影响，但当DSPE-PEG2000含量不断增加时，纳米粒子的颗粒大小先降低，当药物与DSPE-PEG2000质量比小于1∶1.5时，粒径无显著性变化，因此，药物与DSPE-PEG2000的质量比选择1∶1.5。

      药物∶DSPE-
      PEG2000      		 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      2∶1 半透明 82.86±2.15 0.107±0.01 90.48±0.49
      1∶1 半透明 78.16±2.05 0.351±0.38 90.41±0.34
      1∶1.5 半透明 72.23±2.60 0.110±0.02 89.66±1.25
      1∶2 半透明 74.64±1.81 0.140±0.04 90.90±2.93
      1∶2.5 半透明 75.38±2.10 0.097±0.04 89.48±0.67

      （5）薄膜蒸发法的温度考察

      按照2.3.2（4），采用不同温度制备纳米制剂表征结果如表8所示，在筛选的5个温度中，当温度为45 ℃时，脂质体粒径最小、粒径分散性好、包封率最高，因此，本研究选用45 ℃作为薄膜蒸发温度。

      温度（T/ ℃） 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      35 略透明 159.42±2.42 0.545±0.08 54.94±1.85
      40 半透明 105.93±6.13 0.269±0.03 73.98±1.60
      45 半透明 76.97±2.50 0.105±0.049 91.13±1.45
      50 半透明 91.93±2.60 0.181±0.05 80.27±2.13
      55 半透明 112.23±6.37 0.233±0.06 74.15±2.12

      （6）探头超声时间的考察

      按照2.3.2（5）方法进行研究，结果如表9所示：处理时间较短时，纳米粒径较大，颗粒大小分布不均匀；随着超声处理的延长，粒径减小，包封率也提高；超声时间过长，脂质体结构破坏，导致药物泄露、包封率降低。因此将探头超声处理时间定为90 s。

      超声时间（t/s） 外观 粒径（l/nm） PDI 包封率（%）
      30 沉淀 278.09±4.73 0.857±0.10 42.83±2.76
      60 半透明 113.21±11.16 0.485±0.04 54.96±2.41
      90 半透明 78.13±2.78 0.055±0.02 92.74±0.77
      180 半透明 123.17±8.39 0.430±0.08 76.29±1.76
      240 沉淀 261.85±4.94 0.915±0.20 50.42±2.74

      • 3.3.   紫杉醇棕榈酸酯脂质体PTX-PA/Lip的理化性质表征

    • 综上研究，采用的最优处方和制备工艺如下：精密称取PTX-PA 20 mg、PC98-T 400 mg、DSPE-PEG2000 30 mg，加入适量二氯甲烷溶解，接着45 ℃旋蒸去除有机溶剂，再向圆底烧瓶底部薄膜中加入10 ml重蒸水（预热至同等温度），震荡、水化，得PTX-PA/Lip粗品，最后粗品探头超声（90 s）、过滤（0.22 μm），得最终样品PTX-PA/Lip纳米给药系统。

      采用Zeta-sizer Nano粒度仪测定最优PTX-PA/Lip的粒径、PDI与zeta电位。结果如图3所示，制备的PTX-PA/Lip脂质体粒径大小为（62.75±1.81） nm，PDI为（0.076±0.020），Zeta电位为（−15.9±0.21） mV，表明制备的PTX-PA/Lip纳米给药系统粒径较小、分布均匀、具有良好的分散性。

    4.   总结

    • 本实验合成紫杉醇前药——紫杉醇棕榈酸酯PTX-PA，建立PTX-PA的HPLC定量测定方法，经一系列方法学验证，表明其符合PTX-PA定量分析要求，为后续试验奠定了基础。本实验采用薄膜分散法制备PTX-PA脂质体，工艺简便，技术成熟，并通过单因素筛选对PTX-PA脂质体进行处方优化。本文基于纳米技术成功制备出棕榈酸修饰的紫杉醇脂质体，增强了紫杉醇在靶细胞的递送，为PTX-PA后续的药效学研究奠定基础。

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