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延胡索为罂粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥块茎,主产地为浙江、安徽、江苏等地,中医药应用历史悠久。其具有活血、行气、止痛之功效,用于胸胁,脘腹疼痛,胸痹心痛,经闭痛经,产后淤阻,跌扑肿痛[1]。现代科学研究发现延胡索主要含有生物碱、有机酸、甾体、挥发油、糖类、氨基酸等活性成分[2-3],具有镇痛、镇静催眠、抗溃疡、抗菌、抗炎、抗肿瘤、扩张冠状动脉,增加冠脉血流量,抑制血小板聚集,抗心律失常,改善心肌供氧,增加心输出量等药理作用[4]。含延胡索的中药处方及延胡索乙素制剂广泛应用于胃痛、伤痛、心绞痛、痛经等多种痛症。延胡索临床应用常以炮制品入药,目前常用的炮制方法主要有炒制、醋制、酒制等[5],其中又以醋制为主,醋制可以提高主要活性成分延胡索乙素的含量[6-7],《中国药典》(2015年版)收载醋制延胡索为醋炙和醋煮,醋蒸法始载于明代卢之颐的《本草乘雅半偈》,但药典及其他炮制规范等地方标准也无收载。本实验是在《安徽省中药饮片炮制规范》(2019年版)修订课题的基础上完成,实验数据及操作过程,符合中药标准制定规范要求。
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取净制、切制后的延胡索,大小分档,加醋拌匀、润透,置蒸制容器内,用蒸汽加热蒸透、内无硬心,取出,干燥。炮制操作主药与辅料按延胡索与米醋的质量比为100∶20(kg/kg)制备醋蒸延胡索。
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取10批醋蒸延胡索分别编号为CYHS-01-01~10,观察其大小、形状、色泽、质地、气、味等总结其共性特征。本品呈不规则的圆形厚片,表面黄褐色,有不规则网状皱纹。质硬而脆,断面黄褐色,角质样,有蜡样光泽。微具醋香气,味苦。
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取醋蒸延胡索粉末1 g,参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索薄层鉴别项下制备供试品溶液。另取延胡索对照药材l g,同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品,加甲醇制成每l ml含0.5 mg 的溶液,制成对照品溶液。吸取上述3种溶液各2~3μl分别点于用1%氢氧化钠溶液制备的同一硅胶G 薄层板上,以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘缸中显色约3 min后取出,待板上吸附的碘挥尽后,置紫外光灯(365 nm)下检视。从色谱图上可以看出,供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点和荧光斑点(图1)。
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参照《中国药典》(四部)2015年版0832水分测定法第二法共测定10批次醋蒸延胡索饮片,水分最低值11.87%,最高值15.74%(表1),根据数据及公式μ=
$ \bar x $ + ts/$\sqrt{n} $ +MU[注:$\bar x $ 是样本的平均数;t是置信水平为99%的学生t检测值(单尾);s是样本的标准偏差;n是样本的批数;MU是不确定度评估(MU=0.1270×$\bar x $ )]计算,限度应为15.61%,参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下,拟定水分限度不得超过15.0%。序号 含水量A 含水量B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.62 13.45 13.54 0.63 CYHS-01-02 12.12 12.35 12.24 0.94 CYHS-01-03 12.39 12.62 12.51 0.92 CYHS-01-04 12.15 12.04 12.10 0.45 CYHS-01-05 12.50 12.15 12.33 1.42 CYHS-01-06 14.09 13.86 13.98 0.82 CYHS-01-07 11.97 11.76 11.87 0.88 CYHS-01-08 16.09 15.38 15.74 2.26 CYHS-01-09 12.40 12.06 12.23 1.39 CYHS-01-10 13.07 12.72 12.90 1.36 -
参照《中国药典》(四部)2015年版2302灰分测定法共测定10批次醋制延胡索饮片,总灰分最低值2.77%,最高值3.80%(表2),根据数据参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下,根据公式μ=
$\bar x $ +ts/$\sqrt{n} $ +MU计算,限度应为:3.53%,参考《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下总灰分限度,拟定不得超过4.0%。序号 灰分A 灰分B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 3.15 3.04 3.10 1.78 CYHS-01-02 2.76 2.80 2.78 0.72 CYHS-01-03 2.89 2.93 2.91 0.69 CYHS-01-04 3.78 3.82 3.80 0.53 CYHS-01-05 2.88 2.95 2.92 1.20 CYHS-01-06 2.74 2.79 2.77 0.90 CYHS-01-07 3.24 3.20 3.22 0.62 CYHS-01-08 3.20 3.23 3.22 0.47 CYHS-01-09 3.25 3.29 3.27 0.61 CYHS-01-10 3.22 3.19 3.21 0.47 -
按照《中国药典》(四部)2015年版2201醇溶性浸出物测定法热浸法,用稀乙醇作溶剂,共测定10批次醋延胡索浸出物, 10批醋延胡索的浸出物在11.68%~18.20%之间(表3)。以统计学方法分析测试数据, 基于测试数据, 设定浸出物限度的公式如下:μ=
$\bar x $ −ts/$\sqrt{n}$ −MU(其中,$\bar x $ 是样本的平均数;t是置信水平为99%的学生t检测值(单尾)t0.01,9=2.821;s是样本的标准偏差;n是样本的批数;MU是不确定度评估MU=0.1413×$\bar x $ )。浸出物测定限度为:10.41%。拟定醇溶性浸出物测定法,参照《中国药典》2015年版(四部)2201测定,用稀乙醇作溶剂,浸出物不得少于11.0%。序号 浸出物A 浸出物B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.69 13.48 13.59 0.77 CYHS-01-02 18.51 18.20 18.36 0.84 CYHS-01-03 14.06 14.15 14.11 0.32 CYHS-01-04 13.87 13.67 13.77 0.73 CYHS-01-05 14.39 14.05 14.22 1.20 CYHS-01-06 16.46 16.21 16.34 0.77 CYHS-01-07 14.66 14.50 14.58 0.55 CYHS-01-08 11.43 11.68 11.56 1.08 CYHS-01-09 13.68 13.79 13.74 0.40 CYHS-01-10 11.78 11.92 11.85 0.59 -
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH至6.0)(55∶45)为流动相;检测波长为280 mn。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3 000。
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取P2O5减压干燥12 h后延胡索乙素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含46 μg的溶液,即得。
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取醋蒸延胡索粉末(过三号筛)约0.5 g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 ml,称定重量,浸渍1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
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精密称取纯度为99.8%的延胡索乙素对照品适量置50 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液储备液,分别精密量取一定量的对照品储备液稀释成浓度分别为0.0101、0.0202、0.0404、0.0809、0.1213、0.1618 mg/ml的对照品溶液,注入液相色谱仪,测定含量,以浓度为纵坐标、峰面积为横坐标得标准曲线Y=931.64X+5.1405 (r=0.99995)。
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取CYHS-01-010样品约0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法处理,测定含量,平行取样测定6次,计算每次测定延胡索乙素的含量为0.097%,RSD为2.4%,符合要求。
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精密称取延胡索乙素对照品溶液10 μl注入液相色谱仪,测定峰面积,平行测定8次,计算RSD为1.1%,符合要求。
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取CYHS-01-010样品约0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法处理,分别在0、2、4、6、8、12、24 h测定含量,计算每次测定延胡索乙素的RSD为1.8%,符合规定。
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取CYHS-01-010样品约0.25 g,精密称定,精密加入含延胡素乙素0.202 2 mg的对照品溶液,按供试品溶液制备方法处理,得相关溶液,进液相色谱仪处理,计算含量及加样回收率,理论要求加样回收率85%~110%(CYHS-01-010含量为0.097%),RSD<5%(表4)。
编号 取样量(m/g) 加样量(m/mg) 回收率(%) RSD(%) 1 0.2418 0.2022 100.4 3.3 2 0.2417 0.2022 106.7 3 0.2427 0.2022 104.6 4 0.2462 0.2022 105.7 5 0.2453 0.2022 100.0 6 0.2440 0.2022 98.5 -
测定10批样品,根据数据计算,结果参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下制订,拟定含量限度为:不得少于0.050%(10批检品含量差别不大,最大值与最小值差别接近1倍),见表5。根据公式μ=
$\bar x $ -ts/$\sqrt{n} $ -MU计算,限度应不得少于0.060%,醋蒸为醋制延胡索的一个炮制规格,结合《中国药典》(2015年版)一部延胡索项下的含量限度,设定按干燥品计算,延胡索乙素(C21H25NO4)不少于 0.050%。样品 含量(%) 平均值(%) CYHS-01-01 0.064 0.077 CYHS-01-02 0.068 CYHS-01-03 0.055 CYHS-01-04 0.058 CYHS-01-05 0.072 CYHS-01-06 0.092 CYHS-01-07 0.068 CYHS-01-08 0.100 CYHS-01-09 0.098 CYHS-01-10 0.098 -
辛、苦、温,归肝、脾经。具有活血,行气,止痛之功。性味与归经、功能与主治、用法与用量、储藏等项目参照现行版《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下制定。
Study on quality standard for vinegar-steamed Corydalis rhizoma
doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202102015
- Received Date: 2021-02-20
- Rev Recd Date: 2021-12-10
- Available Online: 2022-01-20
- Publish Date: 2022-01-25
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Key words:
- vinegar-steamed Corydalis rhizoma /
- identify /
- quality standard
Abstract:
Citation: | LIN Yuan, WEI Yuchen, LI Xiaodong, BU Qitao, XU Shihui, ZHANG Chengzhong. Study on quality standard for vinegar-steamed Corydalis rhizoma[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2022, 40(1): 57-61. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.202102015 |