Determination of zolpidem tartrate tablets after radiation by UHPLC

LC-2030 PLUS高效液相色谱仪（日本岛津公司）包括LC-20ADXR溶剂输送泵，SPD-20A紫外检测器，SIL-20AXR 自动进样器和CTO-20A柱温箱；⁶⁰Co辐照装置（海军军医大学辐照中心）。

酒石酸唑吡坦片 (思诺思，杭州赛诺菲制药有限公司，批号ET098)，酒石酸唑吡坦对照品(纯度99.8%，武汉赛维尔生物科技有限公司，批号201921)；甲醇(Merck公司)，磷酸(上海安谱实验科技股份有限公司)，三乙胺(上海安谱实验科技股份有限公司)，均为色谱纯;水为自制纯化水（上海和泰仪器有限公司）。

将酒石酸唑吡坦片（含包装）置于辐照环境中，设定辐射剂量，按照接收剂量为0、8、25、80 kGy进行⁶⁰Co辐射，每天受辐照一次，于1个月后取样。

精密称定酒石酸唑吡坦对照品约10 mg，置10 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得酒石酸唑吡坦对照品储备液；再精密量取1 ml，置 100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度为10 μg/ml的对照品溶液。

取0、8、25、80 kGy辐射后的酒石酸唑吡坦片各10片，精密称定并研细成药粉。精密称取细粉适量（约相当于酒石酸唑吡坦10 mg）置于10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

色谱柱为Inertsil C₁₈柱(3.0 mm×150 mm，3.0 μm)，流动相为乙腈-甲醇-0.05 mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至5.5) (18∶26∶56)，检测波长为254 nm，流速为0.7 ml/min，柱温30℃，进样量为10 μl，色谱图中酒石酸唑吡坦的保留时间为3.92 min，理论塔板数按酒石酸唑吡坦峰计算大于5 000。精密称取标准品配制浓度约为10 μg/ml的对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，测定峰面积，计算峰面积RSD为0.06％，表明仪器精密度良好。每个辐射强度取1批供试品，按照“2.3”项下配制供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，对照品溶液及供试品溶液的色谱结果见图1。

精密量取对酒石酸唑吡坦对照品储备液适量置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为5、10、20、40、80 μg/ml的工作曲线溶液。按“2.4”项下色谱条件分别进样10 μl进行测定，记录色谱图。以酒石酸唑吡坦对照品浓度 (X，μg/ml)为横坐标，相应峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=1.03$ \times $10⁵X+1.5×10⁴， r=0.9996，结果表明酒石酸唑吡坦在5～80 μg/ml浓度范围内，线性关系良好。

精密称取同一批未受辐射的酒石酸唑吡坦片样品粉末（约相当于酒石酸唑吡坦10 mg）6份，照“2.3”项下制成供试品溶液，按“2.4”项下色谱条件分别进样10 μl测定，记录峰面积，计算含量，其平均含量104.2%， RSD为0.87%，表明该方法重复性良好。

取辐射强度为8 kGy 的供试品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定，在0、1、2、5、8、12 h分别进样10 μ1，记录峰面积，峰面积RSD为0.06%，表明溶液在12 h内稳定。

精密称取同一批未辐射酒石酸唑吡坦片样品粉末（约相当于酒石酸唑吡坦10 mg）3份，分别置于10 ml量瓶中，再精密称取酒石酸唑吡坦对照品约8、10、12 mg各3份，分别置于上述3个10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液1 ml，置 100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，每个浓度制备3份。按“2. 4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算平均加样回收率，结果见表1。

每个辐射强度取1批供试品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，平行3份，在“2.4”项的色谱条件下进样分析，记录色谱峰面积，按照外标法计算酒石酸唑吡坦含量，其 0、8、25和80 kGy辐射量下酒石酸唑吡坦平均含量分别为105.1%、106.4%、102.7%和105.4%（表2）。

研究表明测定酒石酸唑吡坦原料药和片剂含量的方法主要有分光光度法^[9]、高效液相色谱法^[10]和毛细管区带电泳法^[11]等。本实验采用超高效液相色谱法，相比于传统的高效液相色谱法，其色谱柱粒径更小，柱效更高， 出峰较快，大大提高了灵敏度和检测效率。

在建立超高效液相色谱法方法过程中，曾选用乙腈-0.05 mol/L磷酸溶液和甲醇-0.05 mol/L磷酸溶液，但是色谱峰不能完全分离，干扰性大。最终选用乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至 5.5) (18∶26∶56)，试验结果表明，流动相中加入适量三乙胺调节其pH值， 在pH4.0～6.5的范围内，分离度随pH值增大而增大^[12]， pH值<4.5时，酒石酸唑吡坦峰形较差，pH值>6.0时，酒石酸唑吡坦峰拖尾严重。经优化，选择pH5.5，其唑吡坦峰的对称性好，理论塔板数高，柱效更高。

实验选定了8、25、80 kGy不同辐射剂量下对酒石酸唑吡坦片稳定性影响进行考察，结果显示随着辐射剂量逐步增大，在其他条件相同的情况下，酒石酸唑吡坦片的主药含量并没有明显变化，酒石酸唑吡坦片能保持相对稳定。药物含量指在制剂中药物量是否符合要求，在药物含量不变的情况下，药物的有效性还与剂型的相关特性有关，如溶出度等。有研究表明，药物受到一定剂量的辐射后，药物的溶出度会发生改变^[13]。后续将从不同辐射剂量的酒石酸唑吡坦片的溶出度、水分等做进一步研究。