-
延胡索为罂粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥块茎,主产地为浙江、安徽、江苏等地,中医药应用历史悠久。其具有活血、行气、止痛之功效,用于胸胁,脘腹疼痛,胸痹心痛,经闭痛经,产后淤阻,跌扑肿痛[1]。现代科学研究发现延胡索主要含有生物碱、有机酸、甾体、挥发油、糖类、氨基酸等活性成分[2-3],具有镇痛、镇静催眠、抗溃疡、抗菌、抗炎、抗肿瘤、扩张冠状动脉,增加冠脉血流量,抑制血小板聚集,抗心律失常,改善心肌供氧,增加心输出量等药理作用[4]。含延胡索的中药处方及延胡索乙素制剂广泛应用于胃痛、伤痛、心绞痛、痛经等多种痛症。延胡索临床应用常以炮制品入药,目前常用的炮制方法主要有炒制、醋制、酒制等[5],其中又以醋制为主,醋制可以提高主要活性成分延胡索乙素的含量[6-7],《中国药典》(2015年版)收载醋制延胡索为醋炙和醋煮,醋蒸法始载于明代卢之颐的《本草乘雅半偈》,但药典及其他炮制规范等地方标准也无收载。本实验是在《安徽省中药饮片炮制规范》(2019年版)修订课题的基础上完成,实验数据及操作过程,符合中药标准制定规范要求。
-
取净制、切制后的延胡索,大小分档,加醋拌匀、润透,置蒸制容器内,用蒸汽加热蒸透、内无硬心,取出,干燥。炮制操作主药与辅料按延胡索与米醋的质量比为100∶20(kg/kg)制备醋蒸延胡索。
-
取10批醋蒸延胡索分别编号为CYHS-01-01~10,观察其大小、形状、色泽、质地、气、味等总结其共性特征。本品呈不规则的圆形厚片,表面黄褐色,有不规则网状皱纹。质硬而脆,断面黄褐色,角质样,有蜡样光泽。微具醋香气,味苦。
-
取醋蒸延胡索粉末1 g,参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索薄层鉴别项下制备供试品溶液。另取延胡索对照药材l g,同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品,加甲醇制成每l ml含0.5 mg 的溶液,制成对照品溶液。吸取上述3种溶液各2~3μl分别点于用1%氢氧化钠溶液制备的同一硅胶G 薄层板上,以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘缸中显色约3 min后取出,待板上吸附的碘挥尽后,置紫外光灯(365 nm)下检视。从色谱图上可以看出,供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点和荧光斑点(图1)。
-
参照《中国药典》(四部)2015年版0832水分测定法第二法共测定10批次醋蒸延胡索饮片,水分最低值11.87%,最高值15.74%(表1),根据数据及公式μ=
$ \bar x $ + ts/$\sqrt{n} $ +MU[注:$\bar x $ 是样本的平均数;t是置信水平为99%的学生t检测值(单尾);s是样本的标准偏差;n是样本的批数;MU是不确定度评估(MU=0.1270×$\bar x $ )]计算,限度应为15.61%,参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下,拟定水分限度不得超过15.0%。表 1 10批醋蒸延胡索水分测定结果(%)
序号 含水量A 含水量B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.62 13.45 13.54 0.63 CYHS-01-02 12.12 12.35 12.24 0.94 CYHS-01-03 12.39 12.62 12.51 0.92 CYHS-01-04 12.15 12.04 12.10 0.45 CYHS-01-05 12.50 12.15 12.33 1.42 CYHS-01-06 14.09 13.86 13.98 0.82 CYHS-01-07 11.97 11.76 11.87 0.88 CYHS-01-08 16.09 15.38 15.74 2.26 CYHS-01-09 12.40 12.06 12.23 1.39 CYHS-01-10 13.07 12.72 12.90 1.36 -
参照《中国药典》(四部)2015年版2302灰分测定法共测定10批次醋制延胡索饮片,总灰分最低值2.77%,最高值3.80%(表2),根据数据参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下,根据公式μ=
$\bar x $ +ts/$\sqrt{n} $ +MU计算,限度应为:3.53%,参考《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下总灰分限度,拟定不得超过4.0%。表 2 10批醋蒸延胡索总灰分测定结果(%)
序号 灰分A 灰分B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 3.15 3.04 3.10 1.78 CYHS-01-02 2.76 2.80 2.78 0.72 CYHS-01-03 2.89 2.93 2.91 0.69 CYHS-01-04 3.78 3.82 3.80 0.53 CYHS-01-05 2.88 2.95 2.92 1.20 CYHS-01-06 2.74 2.79 2.77 0.90 CYHS-01-07 3.24 3.20 3.22 0.62 CYHS-01-08 3.20 3.23 3.22 0.47 CYHS-01-09 3.25 3.29 3.27 0.61 CYHS-01-10 3.22 3.19 3.21 0.47 -
按照《中国药典》(四部)2015年版2201醇溶性浸出物测定法热浸法,用稀乙醇作溶剂,共测定10批次醋延胡索浸出物, 10批醋延胡索的浸出物在11.68%~18.20%之间(表3)。以统计学方法分析测试数据, 基于测试数据, 设定浸出物限度的公式如下:μ=
$\bar x $ −ts/$\sqrt{n}$ −MU(其中,$\bar x $ 是样本的平均数;t是置信水平为99%的学生t检测值(单尾)t0.01,9=2.821;s是样本的标准偏差;n是样本的批数;MU是不确定度评估MU=0.1413×$\bar x $ )。浸出物测定限度为:10.41%。拟定醇溶性浸出物测定法,参照《中国药典》2015年版(四部)2201测定,用稀乙醇作溶剂,浸出物不得少于11.0%。表 3 10批醋蒸延胡索浸出物测定结果(%)
序号 浸出物A 浸出物B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.69 13.48 13.59 0.77 CYHS-01-02 18.51 18.20 18.36 0.84 CYHS-01-03 14.06 14.15 14.11 0.32 CYHS-01-04 13.87 13.67 13.77 0.73 CYHS-01-05 14.39 14.05 14.22 1.20 CYHS-01-06 16.46 16.21 16.34 0.77 CYHS-01-07 14.66 14.50 14.58 0.55 CYHS-01-08 11.43 11.68 11.56 1.08 CYHS-01-09 13.68 13.79 13.74 0.40 CYHS-01-10 11.78 11.92 11.85 0.59 -
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH至6.0)(55∶45)为流动相;检测波长为280 mn。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3 000。
-
取P2O5减压干燥12 h后延胡索乙素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含46 μg的溶液,即得。
-
取醋蒸延胡索粉末(过三号筛)约0.5 g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 ml,称定重量,浸渍1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
-
精密称取纯度为99.8%的延胡索乙素对照品适量置50 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液储备液,分别精密量取一定量的对照品储备液稀释成浓度分别为0.0101、0.0202、0.0404、0.0809、0.1213、0.1618 mg/ml的对照品溶液,注入液相色谱仪,测定含量,以浓度为纵坐标、峰面积为横坐标得标准曲线Y=931.64X+5.1405 (r=0.99995)。
-
取CYHS-01-010样品约0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法处理,测定含量,平行取样测定6次,计算每次测定延胡索乙素的含量为0.097%,RSD为2.4%,符合要求。
-
精密称取延胡索乙素对照品溶液10 μl注入液相色谱仪,测定峰面积,平行测定8次,计算RSD为1.1%,符合要求。
-
取CYHS-01-010样品约0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法处理,分别在0、2、4、6、8、12、24 h测定含量,计算每次测定延胡索乙素的RSD为1.8%,符合规定。
-
取CYHS-01-010样品约0.25 g,精密称定,精密加入含延胡素乙素0.202 2 mg的对照品溶液,按供试品溶液制备方法处理,得相关溶液,进液相色谱仪处理,计算含量及加样回收率,理论要求加样回收率85%~110%(CYHS-01-010含量为0.097%),RSD<5%(表4)。
表 4 加样回收率试验结果
编号 取样量(m/g) 加样量(m/mg) 回收率(%) RSD(%) 1 0.2418 0.2022 100.4 3.3 2 0.2417 0.2022 106.7 3 0.2427 0.2022 104.6 4 0.2462 0.2022 105.7 5 0.2453 0.2022 100.0 6 0.2440 0.2022 98.5 -
测定10批样品,根据数据计算,结果参照《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下制订,拟定含量限度为:不得少于0.050%(10批检品含量差别不大,最大值与最小值差别接近1倍),见表5。根据公式μ=
$\bar x $ -ts/$\sqrt{n} $ -MU计算,限度应不得少于0.060%,醋蒸为醋制延胡索的一个炮制规格,结合《中国药典》(2015年版)一部延胡索项下的含量限度,设定按干燥品计算,延胡索乙素(C21H25NO4)不少于 0.050%。表 5 10批醋蒸延胡索含量测定结果
样品 含量(%) 平均值(%) CYHS-01-01 0.064 0.077 CYHS-01-02 0.068 CYHS-01-03 0.055 CYHS-01-04 0.058 CYHS-01-05 0.072 CYHS-01-06 0.092 CYHS-01-07 0.068 CYHS-01-08 0.100 CYHS-01-09 0.098 CYHS-01-10 0.098 -
辛、苦、温,归肝、脾经。具有活血,行气,止痛之功。性味与归经、功能与主治、用法与用量、储藏等项目参照现行版《中国药典》(一部)2015年版延胡索项下制定。
Study on quality standard for vinegar-steamed Corydalis rhizoma
-
摘要:
目的 制定符合《中国药典》要求的醋蒸延胡索质量标准,用于延胡索醋蒸炮制品种的生产、监督、流通及使用等各环节的质量控制。 方法 参照《中国药典》(四部)2015年版通用检测方法分别对醋蒸延胡索的水分、总灰分、浸出物、主要有效成分含量进行测定。 结果 依据中药质量标准制定指导原则及相关检测方法,根据实验数据,醋蒸延胡索呈不规则的圆形厚片,表面深黄色或黄褐色,有不规则细皱纹。质较硬,断面黄色或黄褐色,角质样,有蜡样光泽,微具醋香气,味苦。其水分含量不超过15.0%,总灰分不得超过4.0%,醇溶性浸出物不少于11.0%,按干燥品计算,含延胡索乙素(C21H25NO4)不少于0.050%。 结论 实验所建立的醋蒸延胡索质量标准符合国家有关中药饮片质量标准制定要求,能够以标准的形式对醋蒸延胡索的质量进行控制。 Abstract:Objective To set up the quality standards for vinegar-steamed Corydalis rhizome, which can be used for the quality control of production, supervision, circulation and application of the steam processed Corydalis rhizoma with vinegar. Methods The moisture content, total ash, ethanol extract content and active ingredients of the steam processed Corydalis rhizoma with vinegar were determined according to the related assay method in Part IV of Chinese Pharmacopeia 2015. Results According to the guidelines from the traditional Chinese medicine quality standards and related testing methods, the moisture content of steam processed Corydalis rhizoma with vinegar should be less than 15.0%, the total ash content less than 4.0%, the ethanol extract content more than 11.0%, and the representative component of tetrahydropalmatine more than 0.05%. Conclusion The established process with this study for the quality standard of vinegar-steamed Corydalis rhizoma was conformed to the state requirements for traditional Chinese medicine. It can be used as a reference for the quality standard of vinegar-steamed Corydalis rhizoma. -
Key words:
- vinegar-steamed Corydalis rhizoma /
- identify /
- quality standard
-
表 1 10批醋蒸延胡索水分测定结果(%)
序号 含水量A 含水量B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.62 13.45 13.54 0.63 CYHS-01-02 12.12 12.35 12.24 0.94 CYHS-01-03 12.39 12.62 12.51 0.92 CYHS-01-04 12.15 12.04 12.10 0.45 CYHS-01-05 12.50 12.15 12.33 1.42 CYHS-01-06 14.09 13.86 13.98 0.82 CYHS-01-07 11.97 11.76 11.87 0.88 CYHS-01-08 16.09 15.38 15.74 2.26 CYHS-01-09 12.40 12.06 12.23 1.39 CYHS-01-10 13.07 12.72 12.90 1.36 表 2 10批醋蒸延胡索总灰分测定结果(%)
序号 灰分A 灰分B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 3.15 3.04 3.10 1.78 CYHS-01-02 2.76 2.80 2.78 0.72 CYHS-01-03 2.89 2.93 2.91 0.69 CYHS-01-04 3.78 3.82 3.80 0.53 CYHS-01-05 2.88 2.95 2.92 1.20 CYHS-01-06 2.74 2.79 2.77 0.90 CYHS-01-07 3.24 3.20 3.22 0.62 CYHS-01-08 3.20 3.23 3.22 0.47 CYHS-01-09 3.25 3.29 3.27 0.61 CYHS-01-10 3.22 3.19 3.21 0.47 表 3 10批醋蒸延胡索浸出物测定结果(%)
序号 浸出物A 浸出物B 平均值 相对偏差 CYHS-01-01 13.69 13.48 13.59 0.77 CYHS-01-02 18.51 18.20 18.36 0.84 CYHS-01-03 14.06 14.15 14.11 0.32 CYHS-01-04 13.87 13.67 13.77 0.73 CYHS-01-05 14.39 14.05 14.22 1.20 CYHS-01-06 16.46 16.21 16.34 0.77 CYHS-01-07 14.66 14.50 14.58 0.55 CYHS-01-08 11.43 11.68 11.56 1.08 CYHS-01-09 13.68 13.79 13.74 0.40 CYHS-01-10 11.78 11.92 11.85 0.59 表 4 加样回收率试验结果
编号 取样量(m/g) 加样量(m/mg) 回收率(%) RSD(%) 1 0.2418 0.2022 100.4 3.3 2 0.2417 0.2022 106.7 3 0.2427 0.2022 104.6 4 0.2462 0.2022 105.7 5 0.2453 0.2022 100.0 6 0.2440 0.2022 98.5 表 5 10批醋蒸延胡索含量测定结果
样品 含量(%) 平均值(%) CYHS-01-01 0.064 0.077 CYHS-01-02 0.068 CYHS-01-03 0.055 CYHS-01-04 0.058 CYHS-01-05 0.072 CYHS-01-06 0.092 CYHS-01-07 0.068 CYHS-01-08 0.100 CYHS-01-09 0.098 CYHS-01-10 0.098 -
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)2015年版 [S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015. [2] 冯自立, 赵正栋, 刘建欣. 延胡索化学成分及药理活性研究进展[J]. 天然产物研究与开发, 2018, 30(11):2000-2008. [3] 何晓凤, 张晶, 张梅. 延胡索化学成分、药理活性及毒副作用研究进展[J]. 上海中医药杂志, 2017, 51(11):97-100. [4] 董庆海, 吴福林, 王涵, 等. 延胡索药学研究进展[J]. 中国野生植物资源, 2019, 38(1):48-53,79. [5] 龚千锋. 中药炮制学[M]. 4版. 北京: 中国中医药出版社, 2016. [6] 黄小平. 不同的炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响[J]. 当代医药论丛, 2019, 17(18):167-168. doi: 10.3969/j.issn.2095-7629.2019.18.127 [7] 肖辉. 不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响[J]. 中国药业, 2016, 25(4):29-31. [8] 孟德阳. 延胡索醋炙前后饮片和煎剂中延胡索乙素含量变化对比[J]. 吉林中医药, 2018, 38(2):198-201. [9] 谢明. 延胡索醋制前后总生物碱含量测定及对小鼠的镇痛作用比较[J]. 海峡药学, 2014, 26(3):33-34. [10] 江国荣, 禤雪梅, 潘雪莲, 等. 不同炮制方法对中药延胡索中有效成分含量的影响[J]. 北方药学, 2016, 13(11):5,121. [11] 李春, 蒋晓煌, 蒋孟良, 等. 正交试验优选延胡索醋蒸法炮制工艺[J]. 中医药导报, 2015, 21(6):53-55. [12] 郑军献, 徐雁, 洪春霞, 等. 延胡索不同加工工艺的研究[J]. 浙江中医杂志, 2012, 47(5):379-380. doi: 10.3969/j.issn.0411-8421.2012.05.058 [13] 龙全江, 张颖, 徐雪琴. 不同加工方法对延胡索3种生物碱含量的影响[J]. 中国中医药信息杂志, 2017, 24(7):90-93. doi: 10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.021 [14] 王安铸, 马晓昌. 延胡索乙素的研究进展[J]. 中华中医药杂志(原中国医药学报), 2020, 35(4):1927-1929.