下载:
下载:
-
复方苯海拉明乳膏是由盐酸苯海拉明、醋酸地塞米松、樟脑、薄荷脑等制成，是长海医院院内特色制剂，临床使用多年，主治过敏性皮炎、接触性皮炎及皮肤瘙痒症等皮肤病，疗效显著。原质量标准仅测定醋酸地塞米松含量，对反映药效的盐酸苯海拉明未建立质控方法。本研究建立测定复方苯海拉明乳膏中盐酸苯海拉明含量的HPLC法，为提高复方苯海拉明乳膏的质量控制标准提供参考。
-
岛津高效液相色谱仪（包括LC-20AD泵、SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20A控制器和LC solution工作站，日本岛津公司），XS205DU 电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司），DL- 720A 超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）等。
-
复方苯海拉明乳膏（规格：20 g：盐酸苯海拉明200 mg与醋酸地塞米松10 mg，长海医院药学部自制，批号：201008、201104、201105）；盐酸苯海拉明对照品（含量99.2%，启东东岳药业有限公司，批号：DH-201909101）；甲醇为色谱纯，无水乙醇、磷酸均为分析纯，水为蒸馏水。
-
色谱柱为ACE5C18S/N-A66766柱（150 mm×4.6 mm，5 µm，英国ACE公司）；流动相为甲醇-水-三乙胺（70∶30∶0.67，用磷酸调pH为6.5）；流速为1.0 ml/min；柱温为室温；检测波长为230 nm；进样量为20 µl。
-
精密称取盐酸苯海拉明对照品1.976 g，置100 ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.976 mg/ml的盐酸苯海拉明对照品储备液。
-
精密称取本品1 g（约相当于盐酸苯海拉明10 mg），置烧杯中，加甲醇约25 ml，置水浴上加热，搅拌，使其溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100 ml量瓶中，同法提取3次，滤液并入量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
-
按本品处方制备不含盐酸苯海拉明的空白乳膏，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。
-
按照“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 µl进样测定。结果表明，供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液色谱图相同的保留时间上有相同的色谱峰，出峰时间为7.8 min, 理论塔板数按盐酸苯海拉明峰计算大于8 000，与相邻峰的分离度大于2.0；而阴性对照品在此处则无色谱峰，说明乳膏基质及其他成分在此色谱条件下对盐酸苯海拉明测定无干扰，表明方法专属性良好，结果见图1。
图 1 复方苯海拉明乳膏中盐酸苯海拉明的HPLC图
-
精密量取“2.2.1”项下盐酸苯海拉明对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到系列浓度为39.52、79.04、118.6、158.1、197.6 µg/ml的盐酸苯海拉明对照品溶液。精密吸取对照品系列溶液各20 µl，按照“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：A=16 944C+14 047，r=0.999 7。结果表明，盐酸苯海拉明在39.52～197.6 µg/ml范围内线性关系良好。
-
精密吸取“2.4”项下浓度为79.04 µg/ml的对照品溶液20 µl，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次，按峰面积计算盐酸苯海拉明的日内精密度为0.82%（n=6）。
-
精密吸取“2.4”项下浓度为79.04 µg/ml的对照品溶液20 µl，按照“2.1”项下色谱条件每日测定1次，连续测定5 d，记录峰面积，计算日间精密度为1.08%（n=5）。表明仪器精密度良好。
-
取同一批号（201008）样品，按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按含量测定方法测定，代入回归方程计算含量，计算得到盐酸苯海拉明的含量为100.2%，RSD为0.78%（n=6），表明方法的重复性良好。
-
按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h各进样1次，记录峰面积，计算得到盐酸苯海拉明的RSD为0.59%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。
-
精密称定9份不含盐酸苯海拉明的空白乳膏各1.0 g，置烧杯中，分别加入已知浓度的盐酸苯海拉明对照品适量，加甲醇约25 ml，置水浴上加热，搅拌，使其溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100 ml量瓶中，同法提取3次，滤液并入量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得相当于标示量的80%、100%、120%的模拟样品各3份，按含量测定方法测定，代入回归方程计算含量，并计算样品的回收率。结果为盐酸苯海拉明的平均回收率100.5%（RSD=0.26%，n=9），见表1。
表 1 复方苯海拉明乳膏加样回收率试验结果 (
$ \overline x $ ±s，n=9)加入量（m/mg） 测得量（m/mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 7.90 7.92±0.09 100.25±1.08 100.47 9.88 9.92±1.16 100.40±1.17 11.86 11.95±0.19 100.76±1.59 -
取3个批号的复方苯海拉明乳膏，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定，记录峰面积，计算盐酸苯海拉明的含量分别为标示量的101.3%、99.83%和99.62%，结果见表2。
表 2 复方苯海拉明乳膏含量测定结果(
$ \overline x $ ±s, n=3)批号 含量（mg/g） RSD（%） 201008 10.13±0.11 1.12 201104 9.98±0.15 0.57 201105 9.96±0.22 0.66 -
盐酸苯海拉明测定的关键在于样品中盐酸苯海拉明的提取，盐酸苯海拉明在水中极易溶解，在乙醇或三氯甲烷中易溶，熔点为167～171℃。本实验比较了不同溶剂如水、乙醇、甲醇及其混合液对样品溶解效果的影响，结果显示，用水为溶剂时，样品不溶，而采用甲醇作为溶剂提取回收率高，且样品溶液进入色谱系统不会有不溶物质析出。供试品为水包油型乳膏，其基质在常温下并不能充分溶解，本研究采用甲醇水浴加热至80℃左右，使供试品中的基质和盐酸苯海拉明完全溶解，再通过冰浴冷却除去乳膏剂中的基质，减少对盐酸苯海拉明的干扰和色谱柱的污染，从而获得相对理想的结果。
-
本研究参考相关文献[1-2]，将对照品溶液和供试品溶液在200～400 nm进行扫描，结果发现，盐酸苯海拉明对照品在258 nm波长处有最大吸收，但供试品在258 nm波长处受杂质峰的影响较大，而230 nm波长处盐酸苯海拉明不受杂质、辅料和溶剂的干扰，因此选择230 nm作为其检测波长。
-
本研究在测定盐酸苯海拉明时,经文献检索[3-7]和《中华人民共和国药典》[8]的收载，对文献和药典中提到的各种流动相分别进行了考察，结果显示，选用甲醇-水（70:30）作为流动相时，分离度较好，且出峰时间适中，但苯海拉明为碱性药物，色谱峰拖尾严重，加入三乙胺，可有效改善色谱峰峰型。
-
本实验旨在对原有质量标准进行提升，原质量标准中已有醋酸地塞米松含量的测定方法，故本实验仅考察盐酸苯海拉明的含量测定方法。
Diphenhydramine hydrochloride asaay in compound diphenhydramine cream by HPLC
-
摘要:
目的 建立HPLC法测定复方苯海拉明乳膏中盐酸苯海拉明的含量。 方法 色谱柱为ACE5C18S/N-A66766柱（150 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为甲醇-水-三乙胺（70:30:0.67，用磷酸调pH为6.5）；检测波长设定230 nm；流速设定1.0 ml/min；乳膏经过提取净化后进样20 µl在室温下分析。 结果 盐酸苯海拉明在39.52～197.6 µg/ml范围内线性关系良好（r=0.999 7），平均回收率为100.5%（RSD=1.25%，n=9），重复性结果显示RSD为0.78%（n=6），所测得盐酸苯海拉明乳膏含量结果为标示量的101.3%、99.83%、99.62%。 结论 本方法准确、灵敏、专属性强、重现性好，对复方苯海拉明乳膏质量控制标准的提高具有参考意义。 Abstract:Objective To establish the HPLC method of assay for diphenhydramine hydrochloride in compound diphenhydramine cream. Method HPLC analysis was carried on ACE5C18S/N-A66766 column (150 mm×4.6 mm, 5 µm) with the mobile phase of methanol-water-triethylamine (70:30:0.67, adjusting pH to 6.50 with phosphoric acid) at room temperature. The detection wavelength was set at 230 nm and the flow rate was 1.0 ml/min. The analyte was extracted from the cream and 20 μl of sample was injected. Results The calibration curve of diphenhydramine hydrochloride was linear in the range of 39.52-197.6 µg/ml (r=0.999 7). The average recovery of diphenhydramine hydrochloride was 100.5% (RSD=1.25%, n=9). The repeatability of the method was expressed using RSD with 0.78% (n=6). The results of assay were 101.3%, 99.83% and 99.62%. Conclusion The method is accurate, sensitive, selective and repeatable, which can be applied for improving the quality standard of compound diphenhydramine cream. -
Key words:
- compound diphenhydramine cream /
- diphenhydramine hydrochloride /
- HPLC
-
糖尿病患者长期的高血糖环境显著影响自主神经系统，导致消化系统功能紊乱，表现为腹胀、便秘或腹泻等一系列消化不良的现象[1]。结肠镜检查作为评估结直肠疾病的关键工具，特别是在早期结肠癌的检测中扮演着不可或缺的角色。然而，不充分的肠道准备工作会直接影响检查的有效性。临床实践中，3 000 ml复方聚乙二醇电解质散剂被广泛采纳作为肠道准备的标准方案[2]。但对于糖尿病患者群体，一方面，自主神经损害减弱了胃肠道的正常蠕动；另一方面，部分患者接受的胰高血糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1Ra）治疗进一步延缓了胃排空速度。在这两重因素共同作用下，糖尿病患者面临肠道清洁不佳的难题，严重影响了结肠镜检查的质量和病变检出率[3, 4]。胆宁片能改善消化过程，减少肠道负担，进一步促进排便[5]，可显著优化糖尿病患者在接受结肠镜检查前的肠道准备状态，进而提升检查的准确性和舒适度。既往曾有研究报道胆宁片可改善2型糖尿病患者的便秘，但未见探讨其在肠道准备中的作用[6]。本研究旨在探索将胆宁片与复方聚乙二醇电解质散的预处理方案应用于糖尿病患者的结肠镜检查，评估胆宁片对提高肠道准备合格率的应用效果，现报告如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选取2022年11月至2024 年5月在海军军医大学第一附属医院内分泌科住院并行结肠镜检查的100例2型糖尿病患者为研究对象。根据是否使用GLP-1Ra类降糖药物（使用GLP-1Ra类药物共22名患者）进行分层随机，分为两组，每组各50例。所有研究对象均签署了知情同意书，本研究已通过我院伦理委员会批准。
纳入标准：①患者必须满足世界卫生组织（WHO）确立的2型糖尿病确诊标准；②研究对象的年龄≥30岁；③日常生活能力评估，即Barthel指数得分，须高于60分。④文化程度高中及以上。
排除标准：①糖尿病病情波动不定，且伴有如心脑血管突发事件等严重并发疾病的患者；②正处于糖尿病急性并发症发作期的患者；③患有急性胆囊炎、急性化脓性胆囊炎或任何急腹症状况、炎症性肠病、消化道梗阻、腹腔手术史、肝硬化、严重肾功能不全、帕金森病、心力衰竭的患者；④存在精神心理性疾病病史或近1周服三环类药物的患者；⑤过度肥胖（BMI>30）的患者[7-9]。
1.2 方法
1.2.1 对照组
①患者教育与心理准备：在肠道准备阶段之初，对参与者进行详尽的教育宣讲，着重说明肠道准备的必要性及其实施步骤，旨在减轻或消除患者面对结肠镜检查时可能产生的焦虑感，营造积极合作的氛围[10]。②膳食管理：要求受试者在结肠镜检查前1 d采用低残渣、半流质饮食模式，晚餐只可吃易消化的半流质食品，避免摄入富含纤维的食物。于检查当日清晨开始禁食，以减少肠道内容物，便于后续检查顺利进行[11]。③药物准备：在进行结肠镜检查前10 h，受试者应分次服用完68.56 g复方聚乙二醇电解质散（组成包括聚乙二醇4 000、无水硫酸钠、氯化钠、氯化钾和碳酸氢钠），药物需溶解在1 000 ml温水中。检查前6 h，受试者再次分次服用完137.12 g复方聚乙二醇电解质散，药物溶解在2 000 ml温水中，以确保肠道得到充分的清洁准备[12]。
1.2.2 实验组
在对照组的基础上从检查前2 d开始，口服胆宁片每日3次，每次5片，共服2 d，其余常规准备方案同对照组。
1.3 观察指标
肠道准备质量评估：采用波士顿量表（Boston Bowel Preparation Scale，BBPS），由肠镜室医生评估各组肠道准备质量。该量表将全结肠分为3个主要的结肠区域，分别为右半结肠（盲肠和升结肠）、横结肠（肝曲到脾曲的部分）、左半结肠（降结肠、乙状结肠和直肠）。每个区域的清洁度分数如下：0分：由于无法清除的固体或液体粪便导致整段肠黏膜无法观察；1分：由于污斑、混浊液体、残留粪便导致部分肠黏膜无法观察；2分：肠道黏膜观察良好，但残留少量污斑、混浊液体、粪便；3分：肠道黏膜观察良好，基本无残留污斑、混浊液体、粪便。每个区域的评分范围是从0～3分，总评分范围是0～9分，最终得分<6分为差，6～7分为良，8～9分为优。总评分越高表明肠道准备质量越好，有助于提高结肠镜检查的准确性和效率[13, 14]。
1.4 统计学方法
采用 SPSS 26.0 软件对数据进行统计分析，符合正态分布的计量资料以（均数±标准差）表示，组间比较用t检验；不符合正态分布的计量资料以中位数和四分位数区间表示，组间比较用非参数检验。计数资料（n, %）用卡方检验比较，以P<0.05 为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 一般资料
本研究共收集100名2型糖尿病患者，随机分为对照组和实验组，每组各50名，对照组和实验组各有11例患者使用GLP-1Ra类降糖药物。其中，对照组平均年龄（56.38±9.44）岁，男性占比72.0%（36/50），平均糖尿病病程（11.26±6.59）年，BMI为（24.21±1.76）kg/m2，糖化血红蛋白为（7.93±1.21）%；实验组平均年龄（57.42±9.99）岁，男性占比68.0%（34/50），平均病程（9.52±7.23）年，BMI为（24.31±2.47）kg/m2，糖化血红蛋白为（7.89±1.21）%。两组间基础资料对比，差异均无统计学意义（P>0.05）。
2.2 BBPS评价两组患者肠道准备质量
根据BBPS评分，评分为“优”的，实验组占66%，显著高于对照组的28%。评分为“良”的，两组都占30%。评分为“差”的，实验组仅4%，远低于对照组的42%。实验组平均分为（7.44±1.03），对照组为（5.58±1.98）。实验组在肠道准备方面表现明显优于对照组，且差异具有统计学意义（P<0.001），见表1。
表 1 BBPS评价肠道准备情况组别 评分 t值 P值 优 良 差 卡方值 P值 对照组 5.58±1.98 −0.589 <0.001 14
（28%）15
（30%）21
（42%）23.377 <0.001 实验组 7.44±1.03 33
（66%）15
（30%）2
（4%）2.3 BBPS评价两组使用GLP-1Ra药物的患者肠道准备质量
对照组和实验组各有11例患者使用GLP-1Ra类降糖药物，对使用GLP-1Ra的糖尿病患者单独进行比较：实验组的BBPS平均得分为（6.64±0.81），高于对照组的平均得分（3.64±0.92）；实验组BBPS评分有1人被评为优，10人被评为良，而对照组全部为差。因两组样本量过小，无法进行统计学分析，但以上结果仍提示在使用了GLP-1Ra的情况下，实验组的肠道准备质量优于对照组。
3. 讨论
在进行结肠镜检查前的肠道准备中，糖尿病患者遇到的挑战尤为显著，这与他们复杂的生理病理特征密切相关。血糖水平对胃部活动和排空有直接调控作用。高血糖状态下，胃排空速度受到抑制，造成胃肠道的感觉与运动功能紊乱。病程较长的糖尿病患者可能存在神经病变，尤其是在消化系统方面导致一系列消化不良的症状，如腹胀、便秘或腹泻，影响胃肠道平滑肌的健康与功能，从而影响肠道准备的充分性[15]。
结肠镜检查对于评估结直肠疾病至关重要，尤其在早期结肠癌筛查中发挥关键作用。然而，若肠道准备不充分，可能会延长检查时间并增加并发症风险，直接影响检查的准确性和安全性[16]。尽管3 000 ml复方聚乙二醇电解质散剂是肠道准备的常用标准方案，但糖尿病患者因自主神经受损和使用GLP-1Ra药物治疗的影响，胃肠道蠕动减慢，胃排空延迟，使得肠道清洁难度增加，将直接影响结肠镜检查的效果[17]。
本研究结果显示，胆宁片能够显著改善糖尿病患者的肠道准备效果，尤其是在使用GLP-1Ra的患者中，作用更为明显。胆宁片是一种中药制剂，含有大黄、虎杖、青皮、陈皮、郁金和山楂等成分。山楂促进消化液分泌，增强胃肠蠕动，帮助消化油腻食物，同时还有一定的降脂作用；大黄具有较强的泻下作用，可以清除体内积热，改善便秘症状，并且有解毒、清热的效果；陈皮燥湿化痰，对脾胃功能不佳、消化不良有一定的辅助治疗效果；虎杖具有解毒、活血化瘀的功效，对于体内瘀血、炎症有一定的缓解作用；青皮疏肝理气，适用于肝气郁结引起的消化不良等症状。几种成分共同作用能有效清热、促进肠道运动、疏肝解郁、促进消化酶分泌、加速食物消化、减少肠道负担，同时增强胆汁分泌，帮助脂肪乳化，软化大便，利于排便[18]。
本研究同样面临一些局限性：第一，样本规模较为局限；第二，在探究糖尿病患者治疗方案时，未能细致分类伴随病症及所用降糖药物，此疏忽可能模糊了药物效能与不良反应情况；第三，缺乏对患者依从性的详细记录。未来仍需增加样本量、完善干预措施、评估相关药物以进一步验证和完善方案。
-
表 1 复方苯海拉明乳膏加样回收率试验结果 (
$ \overline x $ ±s，n=9)加入量（m/mg） 测得量（m/mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 7.90 7.92±0.09 100.25±1.08 100.47 9.88 9.92±1.16 100.40±1.17 11.86 11.95±0.19 100.76±1.59 
下载: 导出CSV
表 2 复方苯海拉明乳膏含量测定结果(
$ \overline x $ ±s, n=3)批号 含量（mg/g） RSD（%） 201008 10.13±0.11 1.12 201104 9.98±0.15 0.57 201105 9.96±0.22 0.66
下载: 导出CSV
-
[1] 李云霞, 周娜, 王波云, 等. 高效液相色谱法测定硼黄栓中盐酸苯海拉明和呋喃唑酮的含量[J]. 解放军医药杂志, 2019, 31(7):100-104. doi: 10.3969/j.issn.2095-140X.2019.07.024 [2] 刘珊, 蒋琳兰, 谢新民, 等. HPLC法同时测定氯苯醇溶液中氯霉素和盐酸苯海拉明的含量[J]. 中国药房, 2016, 27(27):3847-3849. doi: 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.34 [3] 韩凌, 王新霞, 吕磊, 等. HPLC法同时测定多效防护霜中盐酸苯海拉明、甲氧基肉桂酸辛酯和水杨酸辛酯的含量[J]. 药学实践杂志, 2019, 37(6):508-511. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.06.007 [4] 杨涛, 靳婷, 王荣, 等. 建立快速检测制剂中盐酸苯海拉明含量的方法[J]. 解放军医药杂志, 2017, 29(6):110-112. [5] 廖娴, 黄月纯, 丘振文, 等. HPLC法测定苯海拉明麻黄素滴鼻液中盐酸苯海拉明含量[J]. 亚太传统医药, 2018, 14(5):33-35. [6] 白林, 范金钊, 蔡乐, 等. HPLC法测定盐酸苯海拉明乳膏的含量[J]. 中国药物应用与监测, 2014, 11(6):348-350. [7] SABINS D, DIEP T, MCCARTAN P, et al. Stability and compatibility of diphenhydramine hydrochloride in intravenous admixtures: a new look at an old drug[J]. Hosp Pharm,2019,54(5):330-334. doi: 10.1177/0018578718802586 [8] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2020年版)二部[S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2020: 1199. -
点击查看大图
计量
- 文章访问数: 3850
- HTML全文浏览量: 1443
- PDF下载量: 33
- 被引次数: 0
