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应中央军委要求,2022年9月起,《药学实践杂志》将更名为《药学实践与服务》,双月刊,正文96页;2023年1月起,拟出版月刊,正文64页,数据库收录情况与原《药学实践杂志》相同。欢迎作者踊跃投稿!

复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响

钱珺 谢凡 卫克昭 高建平 李文艳

钱珺, 谢凡, 卫克昭, 高建平, 李文艳. 复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
引用本文: 钱珺, 谢凡, 卫克昭, 高建平, 李文艳. 复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
QIAN Jun, XIE Fan, WEI Kezhao, GAO Jianping, LI Wenyan. Effects of compound Ziyin granule on sex hormones and oxidative stress levels of ovariectomized rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
Citation: QIAN Jun, XIE Fan, WEI Kezhao, GAO Jianping, LI Wenyan. Effects of compound Ziyin granule on sex hormones and oxidative stress levels of ovariectomized rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023

复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
基金项目: 上海市浦东新区中医药研发创新专项(PDZYYFCX-201701);上海市临床药学重点专科建设项目(区属)经费资助(2018)
详细信息
    作者简介:

    钱 珺,硕士,药师,研究方向:中药活性成分与质量标准研究,Email:qianjun9334@163.com

    通讯作者: 李文艳,硕士,主任药师,硕士生导师,研究方向:中药新药和临床药学研究,Email:liwenyan_linda@163.com
  • 中图分类号: R285

Effects of compound Ziyin granule on sex hormones and oxidative stress levels of ovariectomized rats

  • 摘要:   目的  研究复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响。  方法  实验分为模型组、六味地黄丸组、戊酸雌二醇组、滋肾养阴汤剂组和复方滋阴颗粒(低、中、高剂量)组、正常组和假手术组,给药8周,检测血清雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。  结果  与模型组比较,复方滋阴颗粒(简称“颗粒”)中、高剂量可显著升高E2水平,中剂量可降低LH水平,低、中、高剂量均可降低FSH水平;颗粒中、高剂量可显著升高T-SOD、GSH-Px活性,降低MDA水平,低剂量则可升高T-SOD活性并降低MDA水平(P<0.05或P<0.01)。与戊酸雌二醇组比较,低剂量可明显升高T-SOD活性(P<0.05);与汤剂组比较,颗粒中、高剂量可明显升高GSH-Px活性(P<0.05)。  结论  复方滋阴颗粒对去卵巢围绝经期模型大鼠垂体-卵巢轴的性激素分泌功能的异常有逆转作用,并提高其抗氧化能力。
  • 表  1  复方滋阴颗粒对围绝经期模型大鼠性激素水平的影响($\bar x$±sn=8)

    组别剂量(g生药/kg)E2(ng/L)FSH(IU/L)LH(ng/L)
    正常组6.36±0.062.57±0.02438.03±3.89
    假手术组6.86±0.132.63±0.04437.49±2.92
    模型组4.56±0.11##2.94±0.02#428.50±1.55
    六味地黄丸组 0.96.76±0.13**2.60±0.03**393.35±2.38*
    戊酸雌二醇组0.2 mg/kg6.94±0.11**2.62±0.02**408.66±2.66
    滋肾养阴汤组16.76.10±0.12**2.60±0.02**383.42±3.05*
    复方滋阴颗粒组
     低剂量 5.06.03±0.182.56±0.03**382.25±6.30
     中剂量10.06.73±0.10**2.71±0.03*▲367.96±2.13**
     高剂量2 0.05.80±0.14*▲2.70±0.02**370.22±4.91
    注:“—”表示不给药。
    *P<0.05,**P<0.01,与模型组比较;#P<0.05,##P<0.01,与假手术组比较;P<0.05,与戊酸雌二醇组比较。
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    表  2  复方滋阴颗粒对围绝经期模型大鼠血清氧化应激水平的影响($\bar x$±sn=8)

    组别剂量(g生药/kg)MDA(nmol/ml)T-SOD(U/ml)GSH-Px(酶活力单位)
    正常组5.60±0.1026.53±0.77689.19±1.91
    假手术组5.78±0.0924.03±0.25669.60±7.95
    模型组6.59±0.2021.12±0.36#608.79±3.33#
    六味地黄丸组 0.95.28±0.10**26.84±0.38**629.77±3.67
    戊酸雌二醇组0.2 mg/kg4.69±0.10**24.39±0.20*668.24±4.15**
    滋肾养阴汤组16.74.40±0.07**25.62±0.56*621.89±3.44
    复方滋阴颗粒组
     低剂量 5.04.72±0.10**28.30±0.54**▲627.04±2.79
     中剂量10.05.28±0.07*26.50±0.37**670.17±5.78*△
     高剂量20.04.93±0.12**25.09±0.22**674.04±6.10**△
    注:“—”表示不给药。
    *P<0.05,**P<0.01,与模型组比较;#P<0.05,与假手术组比较;P<0.05,与戊酸雌二醇组比较;P<0.05,与滋肾养阴汤组比较。
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-12-05
  • 修回日期:  2020-03-09
  • 网络出版日期:  2020-09-22
  • 刊出日期:  2020-09-25

复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响

doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
    基金项目:  上海市浦东新区中医药研发创新专项(PDZYYFCX-201701);上海市临床药学重点专科建设项目(区属)经费资助(2018)
    作者简介:

    钱 珺,硕士,药师,研究方向:中药活性成分与质量标准研究,Email:qianjun9334@163.com

    通讯作者: 李文艳,硕士,主任药师,硕士生导师,研究方向:中药新药和临床药学研究,Email:liwenyan_linda@163.com
  • 中图分类号: R285

摘要:   目的  研究复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响。  方法  实验分为模型组、六味地黄丸组、戊酸雌二醇组、滋肾养阴汤剂组和复方滋阴颗粒(低、中、高剂量)组、正常组和假手术组,给药8周,检测血清雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。  结果  与模型组比较,复方滋阴颗粒(简称“颗粒”)中、高剂量可显著升高E2水平,中剂量可降低LH水平,低、中、高剂量均可降低FSH水平;颗粒中、高剂量可显著升高T-SOD、GSH-Px活性,降低MDA水平,低剂量则可升高T-SOD活性并降低MDA水平(P<0.05或P<0.01)。与戊酸雌二醇组比较,低剂量可明显升高T-SOD活性(P<0.05);与汤剂组比较,颗粒中、高剂量可明显升高GSH-Px活性(P<0.05)。  结论  复方滋阴颗粒对去卵巢围绝经期模型大鼠垂体-卵巢轴的性激素分泌功能的异常有逆转作用,并提高其抗氧化能力。

English Abstract

钱珺, 谢凡, 卫克昭, 高建平, 李文艳. 复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
引用本文: 钱珺, 谢凡, 卫克昭, 高建平, 李文艳. 复方滋阴颗粒对去卵巢大鼠性激素和氧化应激水平的影响[J]. 药学实践与服务, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
QIAN Jun, XIE Fan, WEI Kezhao, GAO Jianping, LI Wenyan. Effects of compound Ziyin granule on sex hormones and oxidative stress levels of ovariectomized rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
Citation: QIAN Jun, XIE Fan, WEI Kezhao, GAO Jianping, LI Wenyan. Effects of compound Ziyin granule on sex hormones and oxidative stress levels of ovariectomized rats[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2020, 38(5): 431-434. doi: 10.12206/j.issn.1006-0111.201912023
  • 围绝经期综合征(PMS)是指妇女从性成熟期步入老年期这一过渡阶段出现的一系列植物神经系统功能紊乱所导致的症状,又称“更年期综合征”。西医通常采用激素替代治疗,但临床禁忌证较多[1],且获益-风险仍存在一定争议[2]。中药复方具有多靶点、不良反应少、疗效肯定、不易复发等特点,是PMS防治的理想选择之一[3]。复方滋阴颗粒根据上海市浦东新区公利医院中医科临床经验方滋肾养阴汤(滋阴补肾方)改制而成,具有便于服用、携带、储藏和运输的优点,患者耐受性更好[4]。经20余年临床应用和对该方先后进行的一系列临床研究证实,滋肾养阴方在改善PMS症候、调节雌激素受体及其相关蛋白的表达方面均有效验[5-7]。本课题组前期已顺利建立该颗粒的制备工艺和质控方法[8-9]。现以去卵巢大鼠为模型,研究复方滋阴颗粒对其性激素和氧化应激水平的影响,为该颗粒剂的临床应用提供实验依据。

    • HH-4型水浴锅(江苏杰瑞尔电器有限公司);TGL-16G-A型冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);JA5003AL型天平(上海景天电子仪器有限公司);Biotek Synergy HT型酶标仪(香港基因有限公司)。

    • 复方滋阴颗粒、滋肾养阴汤剂均为上海市浦东新区公利医院药剂科自制,颗粒批号:171202,常温干燥避光保存,1.00 g浸膏粉相当于4.21 g生药;汤剂浓度为167 g生药/150 ml剂。六味地黄丸(兰州佛慈制药股份有限公司,批号:17C204),戊酸雌二醇片(拜耳广州分公司,批号:383A)分别临用前研磨后定容至所需浓度。注射用青霉素钠(华北制药股份有限公司,批号:F7112104),临用前加入注射用水现配现用。

    • T-SOD测试盒(羟胺法,批号:20180726)、MDA测试盒(批号:20180730)、GSH-Px测定试剂盒(比色法,批号:20180731)均购于南京建成生物工程研究所;大鼠FSH ELISA试剂盒(批号:201807)、E2 ELISA试剂盒(批号:201807)、LH ELISA试剂盒(批号:201807)均购于上海哈灵生物科技有限公司。

    • 雌性SD大鼠,72只,清洁级,体重200~220 g,购于上海斯莱克实验动物有限公司,生产许可证号:SCXK(沪)2012 - 0002。饲养于上海中医药大学动物实验中心,温度22~24 ℃,湿度(40±5)%,每天12 h光照。适应性饲养1周后用于实验。

    • 除正常组外,其他雌性大鼠以3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,假手术组大鼠切除两侧卵巢下方的部分脂肪组织后缝合,其他大鼠均切除两侧卵巢。术后3 d,每日1次肌内注射青霉素20万U,从第4天开始连续5 d阴道涂片观察动情周期,以动情周期无变化确定去除卵巢彻底[10]

    • 除正常组和假手术组,将造模成功的大鼠随机分为模型组、六味地黄丸组(0.9 g生药/kg)、戊酸雌二醇组(0.2 mg/kg)、滋肾养阴汤剂组(16.7 g生药/kg)和复方滋阴颗粒低、中、高剂量组(5.0、10.0、20.0 g生药/kg)。手术后第7天开始,各药物组动物给予相应药液灌胃,正常组、假手术组和模型组大鼠给予等容积的蒸馏水灌胃,每日1次,每5 d称体重1次,随体重调整给药量,连续灌胃给药8周。

    • 将灌胃8周的大鼠禁食不禁水12 h,依据体重灌胃给药后,用25%乌来糖(0.4 ml/100 g)腹腔注射麻醉,腹主动脉取血,室温静置1.0 h后离心10 min,转速4 000 r/min,取上层血清用于测定指标。采用ELISA法检测血清中E2、FSH、LH浓度;分别采用羟胺法和DTNB法检测血清中T-SOD 和GSH-Px 活性,采用TBA 法检测血清MDA 含量。所有操作均按试剂盒说明书进行。

    • 实验数据采用SPSS 21.0软件进行统计分析。结果采用($\bar x$±s)形式表示。采用单因素方差分析方法,LSD法用于组间的两两比较,对于方差不齐者,采用Dunnett's T3法分析,对于正态不齐者,采用秩和检验法分析。以P<0.05为有统计学差异。

    • 与假手术组相比,模型组大鼠血清E2显著降低,FSH水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,六味地黄丸组、戊酸雌二醇组、滋肾养阴汤剂组、复方滋阴颗粒中、高剂量组大鼠血清E2水平显著增加(P<0.05或P<0.01),所有给药组大鼠血清FSH水平显著降低(P<0.05或P<0.01),六味地黄丸组、汤剂组、颗粒中剂量组大鼠LH水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与戊酸雌二醇组相比,颗粒高剂量对E2水平的影响弱于戊酸雌二醇(P<0.05),而颗粒中剂量组的FSH水平明显高于戊酸雌二醇组(P<0.05);而与六味地黄丸组、汤剂组相比,颗粒低、中、高剂量组则均无明显差异。具体见表1

      表 1  复方滋阴颗粒对围绝经期模型大鼠性激素水平的影响($\bar x$±sn=8)

      组别剂量(g生药/kg)E2(ng/L)FSH(IU/L)LH(ng/L)
      正常组6.36±0.062.57±0.02438.03±3.89
      假手术组6.86±0.132.63±0.04437.49±2.92
      模型组4.56±0.11##2.94±0.02#428.50±1.55
      六味地黄丸组 0.96.76±0.13**2.60±0.03**393.35±2.38*
      戊酸雌二醇组0.2 mg/kg6.94±0.11**2.62±0.02**408.66±2.66
      滋肾养阴汤组16.76.10±0.12**2.60±0.02**383.42±3.05*
      复方滋阴颗粒组
       低剂量 5.06.03±0.182.56±0.03**382.25±6.30
       中剂量10.06.73±0.10**2.71±0.03*▲367.96±2.13**
       高剂量2 0.05.80±0.14*▲2.70±0.02**370.22±4.91
      注:“—”表示不给药。
      *P<0.05,**P<0.01,与模型组比较;#P<0.05,##P<0.01,与假手术组比较;P<0.05,与戊酸雌二醇组比较。
    • 与正常组相比,假手术组大鼠血清的T-SOD活性没有显著降低。与假手术组相比,模型组大鼠血清的T-SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05),MDA含量没有显著变化。与模型组相比,各给药组大鼠血清T-SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01);戊酸雌二醇组与复方滋阴颗粒中、高剂量组大鼠血清GSH-Px活性显著升高(P<0.05或P<0.01)。与六味地黄丸组相比,颗粒低、中、高剂量组在T-SOD、MDA和GSH-Px水平均无明显差异;与戊酸雌二醇组相比,颗粒低剂量升高T-SOD活性的作用强于戊酸雌二醇、使GSH-Px活性升高的作用弱于戊酸雌二醇(P<0.05),而颗粒中、高剂量组则无明显差异;与滋肾养阴汤剂组相比,颗粒中、高剂量升高GSH-Px水平作用更明显(P<0.05),而颗粒低剂量与汤剂比则无明显差异。具体见表2

      表 2  复方滋阴颗粒对围绝经期模型大鼠血清氧化应激水平的影响($\bar x$±sn=8)

      组别剂量(g生药/kg)MDA(nmol/ml)T-SOD(U/ml)GSH-Px(酶活力单位)
      正常组5.60±0.1026.53±0.77689.19±1.91
      假手术组5.78±0.0924.03±0.25669.60±7.95
      模型组6.59±0.2021.12±0.36#608.79±3.33#
      六味地黄丸组 0.95.28±0.10**26.84±0.38**629.77±3.67
      戊酸雌二醇组0.2 mg/kg4.69±0.10**24.39±0.20*668.24±4.15**
      滋肾养阴汤组16.74.40±0.07**25.62±0.56*621.89±3.44
      复方滋阴颗粒组
       低剂量 5.04.72±0.10**28.30±0.54**▲627.04±2.79
       中剂量10.05.28±0.07*26.50±0.37**670.17±5.78*△
       高剂量20.04.93±0.12**25.09±0.22**674.04±6.10**△
      注:“—”表示不给药。
      *P<0.05,**P<0.01,与模型组比较;#P<0.05,与假手术组比较;P<0.05,与戊酸雌二醇组比较;P<0.05,与滋肾养阴汤组比较。
    • 目前学术界较为认可的PMS的发病机制是围绝经期性器官逐渐萎缩,卵巢停止排卵,以E2为主的雌激素和孕激素水平不断降低,对下丘脑-垂体反馈抑制作用减弱,进而LH和FSH浓度升高;同时卵泡产生抑制素减少,使LH和FSH浓度升高,下丘脑-垂体对雌激素敏感性降低,最终导致内分泌和植物神经系统紊乱,引起一系列临床症状[11]。从中医诊治角度,本病属阴虚证,病因多为肾精亏损,天葵衰竭,精血两虚,冲任不调,其中肾精亏损是其根本所在。因此治疗当以补肾虚为主[12-13]。方中生地、菟丝子共为君药,奏填精益髓,滋补肾阴之效;女贞子、墨旱莲、黄精、山茱萸共为臣药,助君药共行滋阴养血,益肝肾而补精之效;佐药茯苓、泽泻、淮山药利水渗湿,健脾宁心;牡丹皮清热凉血,制诸药温涩之性。现代药理学研究证明,女贞子、墨旱莲、菟丝子黄酮提取物具有雌激素样活性[14]。本实验中模型组大鼠血清E2明显降低,FSH水平明显升高,与临床PMS的激素变化吻合;复方滋阴颗粒、汤剂组均能显著升高血清E2水平,降低FSH和LH水平,作用与六味地黄丸、戊酸雌二醇相当。

      衰老的机体存在着一定的抗氧化能力下降趋势,围绝经期阴虚火旺的症状与代谢过程中氧化还原反应增强有关[15]。体内MDA含量升高,SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性降低,使过多的自由基聚集,线粒体内膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,导致新陈代谢紊乱,调节功能失调,加速衰老。SOD是需氧生物体内唯一可以消耗超氧化物自由基的酶蛋白,可阻断超氧化物自由基引发的一级反应,较高的SOD浓度对清除内环境代谢及药物等外环境引入的氧离子起积极作用;GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶,可阻断脂质过氧化物引发的二级反应,减少对机体的损害;MDA则是脂质过氧化重要产物之一,具有细胞毒性[16]。三者均为反映机体自由基水平和清除自由基能力的主要指标。大量药理学研究结果表明,方中女贞子、墨旱莲、菟丝子、山茱萸、黄精等药味均具有抗氧化、抗衰老的作用。本研究结果表明,复方滋阴颗粒较其他组可显著升高血清T-SOD和GSH-Px活性,具有一定优势。

      本研究证实复方滋阴颗粒可逆转去卵巢围绝经期模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴性激素分泌功能的异常情况,提高雌激素水平,并可提高机体抗氧化能力。与传统汤剂比较,该颗粒药效一致,且在剂型上有一定优势。本课题组将进一步进行复方滋阴颗粒的毒理学等研究,为其安全性提供依据。

参考文献 (16)

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