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复方苯海拉明乳膏是由盐酸苯海拉明、醋酸地塞米松、樟脑、薄荷脑等制成,是长海医院院内特色制剂,临床使用多年,主治过敏性皮炎、接触性皮炎及皮肤瘙痒症等皮肤病,疗效显著。原质量标准仅测定醋酸地塞米松含量,对反映药效的盐酸苯海拉明未建立质控方法。本研究建立测定复方苯海拉明乳膏中盐酸苯海拉明含量的HPLC法,为提高复方苯海拉明乳膏的质量控制标准提供参考。
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色谱柱为ACE5C18S/N-A66766柱(150 mm×4.6 mm,5 µm,英国ACE公司);流动相为甲醇-水-三乙胺(70∶30∶0.67,用磷酸调pH为6.5);流速为1.0 ml/min;柱温为室温;检测波长为230 nm;进样量为20 µl。
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精密称取盐酸苯海拉明对照品1.976 g,置100 ml量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为1.976 mg/ml的盐酸苯海拉明对照品储备液。
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精密称取本品1 g(约相当于盐酸苯海拉明10 mg),置烧杯中,加甲醇约25 ml,置水浴上加热,搅拌,使其溶解,再置冰浴中冷却,滤过,滤液置100 ml量瓶中,同法提取3次,滤液并入量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液。
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按本品处方制备不含盐酸苯海拉明的空白乳膏,再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。
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按照“2.1”项下色谱条件,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 µl进样测定。结果表明,供试品溶液色谱图中,在与对照品溶液色谱图相同的保留时间上有相同的色谱峰,出峰时间为7.8 min, 理论塔板数按盐酸苯海拉明峰计算大于8 000,与相邻峰的分离度大于2.0;而阴性对照品在此处则无色谱峰,说明乳膏基质及其他成分在此色谱条件下对盐酸苯海拉明测定无干扰,表明方法专属性良好,结果见图1。
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精密量取“2.2.1”项下盐酸苯海拉明对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置50 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得到系列浓度为39.52、79.04、118.6、158.1、197.6 µg/ml的盐酸苯海拉明对照品溶液。精密吸取对照品系列溶液各20 µl,按照“2.1”项下色谱条件进样,测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,得到回归方程:A=16 944C+14 047,r=0.999 7。结果表明,盐酸苯海拉明在39.52~197.6 µg/ml范围内线性关系良好。
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精密吸取“2.4”项下浓度为79.04 µg/ml的对照品溶液20 µl,按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次,按峰面积计算盐酸苯海拉明的日内精密度为0.82%(n=6)。
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精密吸取“2.4”项下浓度为79.04 µg/ml的对照品溶液20 µl,按照“2.1”项下色谱条件每日测定1次,连续测定5 d,记录峰面积,计算日间精密度为1.08%(n=5)。表明仪器精密度良好。
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取同一批号(201008)样品,按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液,按含量测定方法测定,代入回归方程计算含量,计算得到盐酸苯海拉明的含量为100.2%,RSD为0.78%(n=6),表明方法的重复性良好。
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按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h各进样1次,记录峰面积,计算得到盐酸苯海拉明的RSD为0.59%(n=5),表明供试品溶液在8 h内稳定。
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精密称定9份不含盐酸苯海拉明的空白乳膏各1.0 g,置烧杯中,分别加入已知浓度的盐酸苯海拉明对照品适量,加甲醇约25 ml,置水浴上加热,搅拌,使其溶解,再置冰浴中冷却,滤过,滤液置100 ml量瓶中,同法提取3次,滤液并入量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得相当于标示量的80%、100%、120%的模拟样品各3份,按含量测定方法测定,代入回归方程计算含量,并计算样品的回收率。结果为盐酸苯海拉明的平均回收率100.5%(RSD=0.26%,n=9),见表1。
表 1 复方苯海拉明乳膏加样回收率试验结果 (
$ \overline x $ ±s,n=9)加入量(m/mg) 测得量(m/mg) 回收率(%) 平均回收率(%) 7.90 7.92±0.09 100.25±1.08 100.47 9.88 9.92±1.16 100.40±1.17 11.86 11.95±0.19 100.76±1.59 -
取3个批号的复方苯海拉明乳膏,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定,记录峰面积,计算盐酸苯海拉明的含量分别为标示量的101.3%、99.83%和99.62%,结果见表2。
表 2 复方苯海拉明乳膏含量测定结果(
$ \overline x $ ±s, n=3)批号 含量(mg/g) RSD(%) 201008 10.13±0.11 1.12 201104 9.98±0.15 0.57 201105 9.96±0.22 0.66
Diphenhydramine hydrochloride asaay in compound diphenhydramine cream by HPLC
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摘要:
目的 建立HPLC法测定复方苯海拉明乳膏中盐酸苯海拉明的含量。 方法 色谱柱为ACE5C18S/N-A66766柱(150 mm×4.6 mm,5 µm);流动相为甲醇-水-三乙胺(70:30:0.67,用磷酸调pH为6.5);检测波长设定230 nm;流速设定1.0 ml/min;乳膏经过提取净化后进样20 µl在室温下分析。 结果 盐酸苯海拉明在39.52~197.6 µg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率为100.5%(RSD=1.25%,n=9),重复性结果显示RSD为0.78%(n=6),所测得盐酸苯海拉明乳膏含量结果为标示量的101.3%、99.83%、99.62%。 结论 本方法准确、灵敏、专属性强、重现性好,对复方苯海拉明乳膏质量控制标准的提高具有参考意义。 Abstract:Objective To establish the HPLC method of assay for diphenhydramine hydrochloride in compound diphenhydramine cream. Method HPLC analysis was carried on ACE5C18S/N-A66766 column (150 mm×4.6 mm, 5 µm) with the mobile phase of methanol-water-triethylamine (70:30:0.67, adjusting pH to 6.50 with phosphoric acid) at room temperature. The detection wavelength was set at 230 nm and the flow rate was 1.0 ml/min. The analyte was extracted from the cream and 20 μl of sample was injected. Results The calibration curve of diphenhydramine hydrochloride was linear in the range of 39.52-197.6 µg/ml (r=0.999 7). The average recovery of diphenhydramine hydrochloride was 100.5% (RSD=1.25%, n=9). The repeatability of the method was expressed using RSD with 0.78% (n=6). The results of assay were 101.3%, 99.83% and 99.62%. Conclusion The method is accurate, sensitive, selective and repeatable, which can be applied for improving the quality standard of compound diphenhydramine cream. -
Key words:
- compound diphenhydramine cream /
- diphenhydramine hydrochloride /
- HPLC
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表 1 复方苯海拉明乳膏加样回收率试验结果 (
$ \overline x $ ±s,n=9)加入量(m/mg) 测得量(m/mg) 回收率(%) 平均回收率(%) 7.90 7.92±0.09 100.25±1.08 100.47 9.88 9.92±1.16 100.40±1.17 11.86 11.95±0.19 100.76±1.59 表 2 复方苯海拉明乳膏含量测定结果(
$ \overline x $ ±s, n=3)批号 含量(mg/g) RSD(%) 201008 10.13±0.11 1.12 201104 9.98±0.15 0.57 201105 9.96±0.22 0.66 -
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