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银黄软胶囊是一种清热、解毒、消炎作用的中成药。因中药起效慢、副作用少,一些不良商家为了寻求暴利,在中成药中添加西药成分,短时间内提高中成药的疗效,误导消费者以寻求高利润。因双氯芬酸钠有消炎镇痛作用、芬布芬有抗炎作用、盐酸罗通定有镇痛作用,就成了不良商家非法添加的成分之列,据报道有30%的抗风湿类健康产品中非法添加了双氯芬酸钠[1],多种抗风湿镇痛类中药制剂中非法添加双氯芬酸钠、芬布芬等此类化学药物[2]。因此,建立一种快速有效的检测方法,对可能非法添加了西药成分的中成药进行现场检测具有重要的意义。
近几年,薄层色谱-表面增强拉曼光谱(TLC-SERS)联用技术广泛地应用于各种领域[3-4],尤其是在药物非法添加研究领域被逐渐认可[5-8]。本研究应用TLC-SERS联用技术,探索双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定在中成药银黄软胶囊中非法添加的鉴别方法,以期为进一步的中成药快速检验提供实验依据。
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对照品双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定最佳出峰条件分别是:双氯芬酸钠点样点胶比2:3,激光功率30%,积分时间30 s;芬布芬点样点胶比2:2,激光功率40%,积分时间30 s;盐酸罗通定点样点胶比1:2,激光功率50%,积分时间30 s。拉曼图谱如图1所示。
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从图2、图3、图4中可以看出,3种对照品在薄层色谱中分离程度高,双氯芬酸钠的比移植(Rf)值为0.75,芬布芬Rf值为0.54,盐酸罗通定Rf值为0.21。由“2.1”项可知,双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定最佳点样点胶比分别为2:3、2:2、1:2(即点样量分别为2 μl、2 μl、1 μl,故银黄软胶囊中添加的双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定最低检测限对应的点样沉积量分别为0.2 μg、0.2 μg、0.1 μg。
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从图5薄层板中可以看出,同时添加了3种对照品的银黄软胶囊模拟的假阳性样品溶液4、5、6、7号中出现了与双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定相同Rf值的斑点,可初步确定4、5、6、7中添加了双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定。为进一步确证,对各斑点进行SERS检测,在拉曼仪数据处理系统中与相应对照品色谱斑点的SERS光谱进行比对,结果表明4、5、6、7号中对应斑点的SERS图谱与双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定对照品的SERS图谱相同,见图5中SERS图谱。
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由图6可知,双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定3种成分的分子结构中均含有苯环、C—C、C=O基团,故3种成分的拉曼光谱特征峰有9个共有峰,在576、712、1 004、1 130、1 240、1 316、1 394、1 454、1 564 cm–1左右,同一共有峰的强度有所不同,取代基不同拉曼位移略有变化(见表1)。此外,由于3种成分的分子结构含有不同的基团,也有相应的差异峰,如740 cm–1为盐酸罗通定特有峰。共有峰、差异峰以及峰强度共同组成了区别于其他成分的特征峰群,这为TLC-SERS专属性鉴别提供了依据。
表 1 3种成分的拉曼光谱特征峰(cm–1)
成分 特征峰 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 双氯芬酸钠 390 576 712 854 1 004 1 130 1 162 1 238 1 316 1 394 1 454 1 570 – 芬布芬 384 576 712 854 1 004 1 130 1 240 1 276 1 316 1 394 1 454 1 564 – 盐酸罗通定 394 576 712 740 1 005 1 132 1 168 1 240 1 278 1 320 1 395 1 456 1 564
Simultaneously detect three illegal additive components in Yinhuang soft capsule by TLC-SERS
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摘要:
目的 建立薄层色谱-表面增强拉曼光谱(TLC-SERS)联用技术同时检测中成药银黄软胶囊中非法添加的西药化学成分双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定。 方法 将待测样品点于硅胶板,用石油醚-乙酸乙酯(3:5)进行薄层展开,在254 nm紫外光灯下进行定位检测,在分离的各个斑点处按优选的最佳条件喷加纳米银胶溶液,用表面增强拉曼光谱(SERS)进行定性鉴别。 结果 本研究建立了TLC-SERS联用技术同时检测银黄软胶囊中非法添加的双氯芬酸钠、芬布芬、盐酸罗通定的方法,并确定了3种化学成分的最低检测限。 结论 TLC-SERS联用技术快速、准确、灵敏度高,可同时快速检测银黄软胶囊中非法添加的双氯芬酸钠、芬布芬和盐酸罗通定3种成分。 -
关键词:
- 银黄软胶囊 /
- 非法添加 /
- 薄层色谱-表面增强拉曼光谱
Abstract:Objective To establish a simultaneous detection of diclofenac sodium, fenbufen and rotundine hydrochloride illegally added in Yinhuang soft capsules by TLC-SERS. Methods The samples to be measured were placed on the silica gel plate, and the thin layer was developed with petroleum ether-ethyl acetate (3:5). Location detection was carried out under 254 nm ultraviolet lamp. Nano-silver colloidal solution was sprayed at each spot of separation according to the optimum conditions, and then qualitative identification was done by TLC-SERS. Results A method for simultaneous determination of diclofenac sodium, fenbufen and rotundine hydrochloride illegally added in Yinhuang soft capsule by TLC-SERS was established. And the minimum detection limits of three chemical constituents were determined. Conclusion TLC-SERS was a rapid, accurate and sensitive method for the simultaneous and rapid detection of diclofenac sodium, fenbufen and rotundine hydrochloride illegally added into Yinhuang soft capsule. -
Key words:
- Yinhuang soft capsule /
- illegal addition /
- TLC-SERS
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表 1 3种成分的拉曼光谱特征峰(cm–1)
成分 特征峰 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 双氯芬酸钠 390 576 712 854 1 004 1 130 1 162 1 238 1 316 1 394 1 454 1 570 – 芬布芬 384 576 712 854 1 004 1 130 1 240 1 276 1 316 1 394 1 454 1 564 – 盐酸罗通定 394 576 712 740 1 005 1 132 1 168 1 240 1 278 1 320 1 395 1 456 1 564 -
[1] 蓝献泉, 黄义纯, 黄红雯, 等. 抗风湿类中成药及保健品中非法添加双氯芬酸钠的快速筛查方法研究[J]. 中南药学, 2014, 12(9):902-905. doi: 10.7539/j.issn.1672-2981.2014.09.020 [2] 吴小红, 李焕德, 朱荣华, 等. HPLC-MS/MS法鉴别中药制剂中非法添加的多种解热镇痛类化学药物[J]. 中南药学, 2010, 8(10):724-729. doi: 10.3969/j.issn.1672-2981.2010.10.002 [3] ZHANG J N, MA X Y, WANG Z P. Real-time and in situ monitoring of abrin induced cell apoptosis by using SERS spectroscopy[J]. Talanta,2019,195:8-16. doi: 10.1016/j.talanta.2018.11.015 [4] LI D W, QU L L, ZHAI W L, et al. Facile on-site detection of substituted aromatic pollutants in water using thin layer chromatography combined with surface-enhanced Raman spectros- copy[J]. Environ Sci Technol,2011,45(9):4046-4052. doi: 10.1021/es104155r [5] 王磊, 陈梦云, 李晓, 等. TLC-SERS法快速分析抗精神失常类中药的化药成分[J]. 实验室研究与探索, 2016, 35(5):22-26. doi: 10.3969/j.issn.1006-7167.2016.05.006 [6] 张彬彬, 史毅, 陈辉, 等. 薄层色谱-表面增强拉曼光谱法快速检测染色掺伪的西红花[J]. 药学实践杂志, 2017, 35(3):215-218. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2017.03.006 [7] 赵瑜, 尹利辉, 胡昌勤. 拉曼光谱法在快速筛查紫杉醇脂质体制剂中的应用[J]. 中国医药导报, 2018, 15(19):24-29. [8] 张中湖, 李军, 谢强胜, 等. TLC-SERS高通量筛查中成药与保健食品中添加的降糖化学物质[J]. 药物分析杂志, 2019, 39(3):467-476.