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嘧啶类化疗药物在肿瘤治疗中的地位越来越重要，其代表药物5-氟尿嘧啶及其口服前药卡培他滨更受到了广泛关注，体内二氢尿嘧啶脱氢酶(DPD)是此类药物代谢的限速酶之一[1]，前瞻性评价DPD的总体活性有利于提高药物疗效及减少患者的毒副反应，对临床具有重要意义。内源性物质尿嘧啶(U)是体内DPD的天然底物，在此酶的催化下生成二氢尿嘧啶(UH2)，并最终通过尿液排出体外。测定血浆中U和UH2的含量，并通过(UH2)/(U)比值计算，可从代谢物的角度评价DPD的活性[2]。临床上常用评价DPD酶活性的方法是测定患者的基因表型，DPD的编码基因DPYD序列中包含了多达7 600个多态位点，使得DPD酶的活性在人群中是高度可变的[3]。不同的突变位点及不同位点的组合给临床检测带来了极大的困难。到目前为止，也只有DPYD*2A的多态性被用于临床实践，用来筛选出5-氟尿嘧啶代谢严重不良的患者，避免严重的毒副反应[4]。单一应用基因的多态性来评价DPD酶的活性在临床上存在一定的困难，基因的多态性并不能直接同下游的酶的活性联系起来，两者并没有完全对等的关系。基因需通过转录、翻译和蛋白的修饰之后才能发挥作用。基因多态联合下游代谢物的含量测定更能准确的评价DPD酶的活性[5]。目前常应用液相色谱-串联质谱联用法对人血浆或干燥唾液中U和UH2浓度进行检测[6-11]，但所报道的方法均有一些复杂或难以重现。本研究成功的建立了一种灵敏、高效、准确、重现性好，且能同时测定人血浆中U和UH2浓度的UHPLC-MS/MS方法，为体内DPD总体活性提供更客观有效的评价途径。
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1290-6460A超高效液相色谱-串联质谱仪，包含G4220A二元泵、G4226A自动进样器、G1316C柱温箱、MassHunter数据处理工作站（美国Agilent）；调速涡旋混合器（美国Labnet）；SK7200H超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；BSA124S-CW分析天平（德国赛多利斯）；5810R型低温高速离心机、移液器（德国Eppendorf公司）。
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尿嘧啶、二氢尿嘧啶和氯尿嘧啶（内标）对照品（纯度>99%,大连美仑生物有限公司）；乙酸铵（美国赛默飞世尔科技）；甲醇、乙腈、乙酸乙酯、异丙醇（色谱纯，德国默克公司）；屈臣氏蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；牛血清白蛋白（BSA）(上海博光生物科技有限公司)；生理盐水（长征医院药学部自制）。
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色谱柱为Agilent poroshell 120 SB-Aq-柱（2.1 mm×100 mm，2.7 μm），流动相为5 mmol/L乙酸铵水溶液(A)和乙腈(B)，流速为0.3 ml/min，梯度洗脱：0～0.3 min，100% A；0.3～1.0 min，100%～10% A；1.0～2.5 min，10% A；柱温为30 ℃，洗脱时间2.5 min，进样量5 μl。
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采用ESI离子源，多重反应监测（MRM）进行一/二级质谱分析，用于定量分析的检测离子为：U[M+H]+ m/z 113.0→40.1，检测模式为正离子模式；UH2[M+H]+ m/z 115.0→55.1，检测模式为正离子模式；氯尿嘧啶（IS）[M-H]- m/z 145.0→42.1，检测模式为负离子模式。雾化温度为300 ℃，雾化气压力为40 psi，干燥气流速为10 L/min，鞘气温度300 ℃，鞘气流速12 L/min，解离电压为4 000 V。
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选取8名血浆样品指标正常的成年人，于当日清晨8时空腹状态下静脉采血3 ml, EDTA-3K管抗凝，离心后分离上层血浆, 于−80 ℃冰箱冻存。
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取100 μl样本，加10 μg/ml氯尿嘧啶（IS）10 μl，加乙酸乙酯3 ml，涡旋5 min，1710×g离心10 min，取上层有机相2.7 ml，45 ℃氮气挥干仪挥干，用10%甲醇溶液100 μl复溶，涡旋1 min，取上清液进样分析。
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用含有3 %牛血清白蛋白作为空白基质代替血浆配置标准曲线样品。取100 μg/ml的尿嘧啶和二氢尿嘧啶各100 μl，加800 μl水，制成10 μg/ml标准混合液，置于−20 ℃备用。取10 μg/ml标准混合液适量，用3 %牛血清白蛋白稀释制成10、20、50、100、200、500、1000、1500 ng/ml系列浓度样品, 然后按照上述“1.6”项下样品的处理方法配制。
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U和UH2的出峰时间以及峰型良好，代替血浆经过前处理后，对待测组分的测定没有干扰，内标对分析物的测定也没有干扰，且能很好分离，结果见图1。
图 1 尿嘧啶和二氢尿嘧啶及内标质谱多反应监测色谱图
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U和UH2的线性范围是10.0～1 500.0 ng/ml，以空白BAS中U和UH2的浓度为横坐标（X），U和UH2与内标化合物氯尿嘧啶的峰面积比为纵坐标（Y），进行最小二乘法加权（权重系数为1/χ2），U和UH2的线性回归方程分别是Y=0.27X+0.0022、Y=0.58X+0.0380，r均>0.990，表明线性关系良好。
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取定量下限、低、中、高标准添加血浆样本按照前处理方法进行处理，每个浓度样品平行制备5份进行分析，连续3 d重复操作，根据当天的标准曲线计算当天实测样本浓度，计算样本在低、中和高浓度下的日内、日间精密度和准确度，结果显示，精密度和准确度的偏差均在15%左右。准确度相对偏差在20%范围内时，最低定量下限精密度偏差不大于20%，结果见表1。
表 1 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的精密度 (n=5)
分析物 标示浓度 (ng/ml) 日内 日间 测定浓度 (ng/ml) 精密度(CV%) 准确性(RE%) 测定浓度 (ng/ml) 精密度(CV%) 准确性(RE%) 尿嘧啶 10 10.2±0.38 3.74 2.58 10.12±0.78 7.70 1.18 20 20.63±1.21 5.87 3.15 19.97±1.35 6.74 −0.16 500 529.73±4.64 0.88 5.95 484.32±35.72 7.37 −3.12 1000 1093.33±25.10 2.30 9.33 1098.25±25.16 2.29 9.82 二氢尿嘧啶 10 10.32±0.71 6.86 3.18 10.28±0.65 6.37 2.77 20 19.98±2.19 10.95 −0.12 19.86±1.85 9.31 −0.72 500 517.51±10.69 2.07 3.50 515.66±10.36 2.01 3.13 1000 1079.83±17.91 1.66 7.98 1080.11±24.50 2.27 8.01 -
取低、高2个浓度的样本进行基质效应和提取回收率考察，结果显示，U、UH2及内标氯尿嘧啶的基质效应和提取回收率良好，结果均较稳定，结果见表2。
表 2 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的基质效应和提取回收率
分析物 标识浓度(ng/ml) 基质效应 提取回收率 平均基质效应 CV(%) 平均回收率 CV(%) 尿嘧啶 1000 101.00 6.15 94.98 9.01 20 99.99 3.63 100.01 7.64 二氢尿嘧啶 1000 85.72 2.07 106.47 1.58 20 93.58 4.53 99.54 9.77 -
考察低、高2个浓度的血浆样品经历3次冷冻与解冻循环的稳定性、血浆样品在室温（25 ºC）放置6 h后经样品处理后稳定性和血浆样品经样品处理后室温放置24 h的稳定性，结果显示，3次冻融、6 h室温（25 ºC）条件下和24 h放置自动进样器中的稳定性均符合要求，结果见表3。
表 3 样品的稳定性(RE%)
分析物 冻融3次 室温放置6 h 置自动进样器24 h 低 高 低 高 低 高 尿嘧啶 100.71 98.34 93.49 106.60 108.20 107.99 二氢尿嘧啶 92.67 92.64 93.61 107.26 106.97 107.15 -
应用本研究所建立的方法，对8名健康成人的血浆样本测定分析，在样本实测过程中, 同时插入已知浓度的随行质控样本(QC样本), 随时监控样本测定的准确度。U和 UH2 浓度测定结果见图2。
图 2 实测8名健康成人内源性U和UH2浓度值
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U和UH2是人体内常见的两种物质，且同核酸的代谢密切相关，由于U和UH2均为人体内源性物质，故不能采用人源的基质进行方法学的开发及验证，通过查阅资料，选择了不含U和UH2的3%牛血清蛋白作为基质进行方法学的开发[12]。也有文献报道采用去除U和UH2的人源血浆基质进行方法学实验[9]，但基质的来源较珍贵，不适合方法的普及，所以选用3%牛血清蛋白作为替代基质。
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U因其特殊的化学性质，在大部分的色谱柱上均没有保留。U和UH2的LogP值分别为−0.707和−0.840，有较强的亲水性，决定了其不保留的性质。在定量方法的开发过程中，先后采用了Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，Agilent Zorbax Eclipse-C18色谱柱，Waters Atlantis T3色谱柱，Waters Xselect色谱柱，Waters Xbridge等色谱柱来进行条件摸索，但上述色谱柱对U和UH2均没有保留。最后，采用Agilent Zorbax SB-Aq对U和UH2进行定量分析，该色谱柱对强极性的化合物有较好的保留效果，同时，兼容100%的起始流动相也对保留产生了良好的结果。
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本研究还分别考察了几种常见的处理方法，包括甲醇和乙腈的蛋白沉淀、Waters Oasis HLB萃取板的固相萃取以及乙酸乙酯，甲基叔丁基醚，二氯甲烷/三氯甲烷，环己烷进行的液液萃取，结果发现乙酸乙酯对U和UH2的萃取效果较好，同时，还分别考察了5%、10%、20%、30%、40%、50%的异丙醇、乙酸乙酯溶液对U和UH2的萃取效果，结果发现，单纯的乙酸乙酯对待测化合物具有较好的提取效率。提取回收率均高于90%，且RSD<10%。另外对3%牛血清蛋白的基质效应进行了考察，结果发现平均基质效应在85%～101%之间，RSD<7%，说明该前处理方法对于基质的清除较为彻底，测定结果稳定，没有明显的基质干扰。
本研究虽重在方法开发，收集的样本数量较少，但从测定的U和UH2浓度分布来看DPD对内源性U的代谢存在个体差异，建议临床应用5-氟尿嘧啶及其卡培他滨筛查DPD总体活性[12-13]，后续可进一步扩大样本数量进行深入研究。
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本实验建立了一种快速，稳定，高灵敏度的UHPLC-MS/MS方法，可用于测定人体内源性物质U和UH2的含量，从代谢物的角度评价DPD酶的活性，从而协助临床医生制定化疗药物5-氟尿嘧啶及其口服前药卡培他滨合理的用量，以较低的毒副反应获得最大的临床疗效。
UHPLC-MS/MS determination of uracil and dihydrouracil in human plasma
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摘要:
目的 建立同时测定人血浆中尿嘧啶(U)和二氢尿嘧啶(UH2)含量的超高效液相色谱串联质谱（UHPLC-MS/MS）方法。 方法 在Agilent 6460A串联质谱仪上采用正离子检测模式，以氯尿嘧啶为内标，3%牛血清蛋白为代血浆基质，样本经乙酸乙酯液液萃取后在Agilent poroshell 120 SB-Aq (2.1 mm×100 mm，2.7 μm)色谱柱上采用梯度洗脱进行色谱分离。流动相为5 mmol/L醋酸铵水溶液和乙腈溶液；流速0.3 ml/min；柱温为30 ℃；进样量为5 μl。 结果 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的线性范围为10.0~1500.0 ng/ml，线性关系良好，其相关系数r>0.990，日内与日间精密度偏差均<15%。 结论 该方法操作简单、选择性好，可用于测定人血浆中尿嘧啶和二氢尿嘧啶的含量。 -
关键词:
- 超高效液相串联质谱法 /
- 尿嘧啶 /
- 二氢尿嘧啶 /
- 含量测定
Abstract:Objective To establish an UHPLC-MS/MS method for the determination of uracil (U) and dihydrouracil (UH2) in human plasma. Methods A positive ion detection mode was adopted on the Agilent 6460A mass spectrometer. Chlorouracil was used as the internal standard. 3% bovine serum albumin was used as surrogate plasma matrix. The pretreatment of plasma sample was completed based on liquid-liquid extraction with ethyl acetate. The chromatographic separation was achieved on an Agilent Poroshell 120 SB-Aq (2.1 mm×100 mm, 2.7 μm) column with gradient elution. The mobile phase was 5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution and acetonitrile solution. The flow rate was 0.3 ml/min. The column temperature was 30°C. The injection volume was 5 μl. Results The linear range of uracil and dihydrouracil was 10.0-1500.0 ng/ml. Both of uracil and dihydrouracil had good linear relationship with correlation coefficient (r)>0.990. Both of inter- and intra-day precision was <15%. Conclusion The established method is simple, selective, and suitable for the determination of U and UH2 in human plasma. -
Key words:
- UHPLC-MS/MS /
- uracil /
- dihydrouracil /
- content determination
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甲巯咪唑（MMI）为硫脲类抗甲状腺药物（ATD），是治疗甲状腺功能亢进症的一线药物，其常见的不良反应为过敏性皮肤反应，一般较轻微，罕见的不良反应有血液系统异常（如全血细胞减少）和肝损伤等，若未及时治疗可危及生命。全血细胞减少是指患者未接受过放、化疗，至少连续2次外周血三系细胞数量均低于正常值，即WBC<4.0×109/L(ANC<1.5×109/L)、RBC<3.5(3.0)×1012/L或Hb<110(100)g/L、PLT<100×109/L[1]。据报道，ATD致全血细胞减少的发生率在日本约为0.01%[2]，在我国约为0.04%[3]，同时合并肝损伤就更为少见。笔者对1例甲巯咪唑致全血细胞减少及肝损伤患者进行病例分析，为治疗该类患者提供用药参考。
1. 病例资料
患者女，30岁，54 kg，因“发热、咽痛、乏力3 d”于2019年10月6日入院。患者6个月前无明显诱因出现怕热多汗、多食易饥、易怒、心悸、失眠症状，7月25日查甲状腺功能：FT3 31.55 pmol/L，TT3 7.38 nmol/L，FT4 85.15 pmol/L，TT4 260.5 nmol/L，TSH<0.005 mIU/L，甲状腺球蛋白抗体（TgAb） 267 IU/ml，甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb） 72.4 IU/ml；肝功能、血常规正常；甲状腺摄碘率：3 h 46.1%，6 h 67.7%，24 h 71.2%；诊断为甲状腺功能亢进症，予甲巯咪唑片10 mg/次，3次/d。9月2日复查甲功：TSH 0.0014 mIU/L，FT3 7.17 pmol/L，FT4 22.51 pmol/L，Anti-TSHR 7.57 IU/L；血常规正常；肝功：ALT 95 IU/L，AST 53 IU/L；予复方甘草酸苷片（含甘草酸苷25 mg）1片/次，3次/d保肝治疗。10月3日患者出现发热、咽痛伴乏力，最高体温40 ℃，自行服用对乙酰氨基酚片0.75 g/次，2次/d。10月5日患者病情无好转，于本院急诊科查血常规：WBC 0.56×109/L，NEUT 0.031×109/L，Hb 94 g/L，PCT 16.24 ng/ml，立即停用甲巯咪唑，予莫西沙星、头孢哌酮舒巴坦、重组人粒细胞刺激因子等治疗1 d，复查血常规：WBC 0.64×109/L，NEUT 0.009×109/L，Hb 97 g/L，为进一步治疗收治入院。患者无心、肝、血液系统疾病史，无药物过敏史，无低碘区居住史。
入院查体：T 40.4 ℃，P 106次/min，R 20次/min，BP 133/68 mmHg；皮肤及巩膜轻度黄染；咽部黏膜充血，扁桃体Ⅱ度肿大、脓性分泌物附着；甲状腺Ⅰ度肿大、质软、无压痛、未扪及结节；右下肢散在黄豆大小皮肤破溃。
入院诊断：甲状腺功能亢进症，中性粒细胞缺乏，化脓性扁桃体炎。
2. 住院期间主要临床信息及药物治疗经过
该患者在本院住院治疗期间的主要临床信息及药物治疗经过详见图1。
3. 讨论
3.1 甲巯咪唑致全血细胞减少及肝损伤的关联性评价
疾病方面，甲亢和严重感染性疾病均可致全血细胞减少。患者出现典型甲亢症状约3个月后开始口服MMI治疗，用药前血常规正常，服药后FT3、FT4降至正常，可排除甲亢导致的全血细胞减少。患者初诊时严重中性粒细胞缺乏、轻度贫血，入院第5天PCT、hsCRP下降明显，仍发展为三系细胞减少，当感染治愈后中性粒细胞未恢复至正常值，可排除严重感染性疾病导致的全血细胞减少。药物方面，无复方甘草酸苷片各组分致全血细胞减少的报道，虽有甘草合剂致血小板减少的个案，但二者关联性不明确[4]。日本一项50 385例的回顾性研究发现，MMI致全血细胞减少的中位时间为41 d（32～97 d），累计剂量为1 200～2 109 mg，但发病机制尚不明确，可能与ATD致中性粒细胞缺乏的机制重叠，当严重的粒细胞缺乏不及时干预可发展为全血细胞减少[2]。患者服用MMI 71 d，累计剂量为2 130 mg，根据Naranjo评估量表患者得分情况如下：该ADR先前有结论性报告（1分）、该ADR是在使用MMI后发生（2分）、存在客观证据证实该ADR与MMI有关（1分），总分4分，故患者全血细胞减少可能与MMI相关。
药物性肝损伤为排他性诊断，患者无肝病史、嗜酒史，经辅助检查可排除甲亢、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、脂肪肝、肝脏占位及胆囊结石导致的肝损伤，故考虑药物因素可能性大。MMI致肝损伤大多发生在用药12周内[5]，主要为胆汁淤积型，其次为肝细胞损伤型和混合型。本例肝损伤首先表现为AST和ALT轻度升高，虽服用复方甘草酸苷片仍出现黄疸，TBIL>5ULN，R值=1.74，为胆汁淤积型重度肝损伤[6], 根据RUCAM量表患者得分情况如下：首次服用MMI 39 d后出现肝脏生化学检查异常（2分）、排查其他原因（2分）、MMI说明书中有肝毒性报告（2分），总分6分，故患者肝损伤很可能与MMI相关。
3.2 甲巯咪唑的停药指征
甲亢患者ATD疗程一般为12～18个月，但当ANC≤0.5×109/L[7]（或ANC<1.5×109/L[8]），或转氨酶>3 ULN或持续升高，或出现黄疸时应停药。患者入院时NEUT 0.009×109/L，皮肤及巩膜可见黄染，因此需立即停用MMI。由于ATD致粒细胞缺乏可能在再次服药时出现，且ATD之间有交叉反应，不宜换用另一种药物，后续可采用放射性131I或外科手术治疗。
3.3 全血细胞减少伴发热的药物治疗
3.3.1 抗感染治疗
患者10月6日NEUT 0.01×109/L，危险度分层为高危，宜采取降阶梯抗感染的策略，初始方案须覆盖铜绿假单胞菌等严重G-菌[9]。患者使用美罗培南4 d，体温波动于39.5 ℃，扁桃体I度肿大，PCT 0.31 ng/ml，评估抗感染效果不佳。由于患者右下肢皮肤破溃未愈合，不排除该处为感染灶之一，因此，临床药师建议联用万古霉素加强抗金黄色葡萄球菌等G+菌力度，于用药48 h后监测谷浓度以确保万古霉素达有效治疗浓度（10～15 mg/L）。患者经美罗培南联合万古霉素抗感染5 d后，体温下降至36.8 ℃，生命体征平稳，选用头孢哌酮舒巴坦行降阶梯治疗。
3.3.2 升白细胞治疗
临床上通常使用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）以降低化疗药物引起的粒细胞缺乏者的感染风险，但二者未被批准用于非化疗药物导致的粒细胞缺乏症。GM-CSF用于ATD诱导的粒细胞减少缺少文献报道，且可引起血小板下降。多数作者主张在严重粒细胞缺乏或预后不佳的重症患者中使用G-CSF，以帮助其度过危险期[3, 10]。一项Meta分析表明，G-CSF可有效缩短亚洲人群ATD致粒细胞缺乏的恢复时间[WMD=−3.16 d(95%CI：−4.58～−1.74，P=0.000)][11]。因骨髓中成熟中性粒细胞约2.5×1012个，而原始粒细胞分化为成熟中性粒细胞需7～14 d，故使用G-CSF后，中性粒细胞绝对值（ANC）曲线呈双峰形。首先，G-CSF促进骨髓中成熟粒细胞向外周血释放形成第1峰，由于新的成熟粒细胞未生成，此时不宜停药；其次，G-CSF刺激骨髓粒系造血祖细胞加速增殖、分化、成熟和释放，使ANC降至最低点后再次逐渐上升形成第2个峰[12]。根据CTCAE5.0标准，患者为中性粒细胞减少4级，使用G-CSF 150 μg/d 4 d后，ANC曲线第1个高峰不明显，可能与药物剂量不足或骨髓长时间被抑制有关。G-CSF升高ANC呈剂量依赖性，一般给药剂量为300 μg/d或5 μg/(kg·d)，重症患者可根据临床效果增加剂量[13-14]，在G-CSF治疗无效时使用小剂量泼尼松可有效升高ANC水平。由于糖皮质激素可抑制免疫反应，患者当前感染严重，因此，临床药师建议将G-CSF的用量增至300 μg/d，同时警惕肌肉、骨骼疼痛等ADR，糖皮质激素仅在G-CSF治疗无效后且在足量抗菌药物的前提下慎重使用[15]。ANC<0.1×109/L是公认的预后不佳的因素之一，可作为G-CSF的停药指征[16]。2015版《临床用药须知》指出，严重感染伴粒细胞减少者，ANC≥1.0×109/L时停用G-CSF。本例患者的ANC经第一个高峰后升至1.593×109/L，此时感染已控制，予以停用G-CSF，合理把握了停药时机。
4. 小结
全血细胞减少合并肝损伤是ATD罕见的严重不良反应，早诊断、早治疗则预后良好，否则可能继发严重感染从而威胁生命。因此，如何防范并及早发现上述不良反应，需临床药师做好用药教育：①建议患者监测血常规，在治疗初期前3个月每周1次，维持治疗期间每月1次，当WBC<4.0×109/L但ANC>1.5×109/L时，通常不用停药，可服用维生素B4等升白细胞药物。②提醒患者服药期间若出现咽喉疼痛、口腔炎、发热等症状，应立即就诊，并告知医生正在服用ATD。③建议患者在治疗初期的前3个月，每月监测1次肝功能，若出现厌食、上腹部疼痛、黄疸等症状时，应立即就诊。
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表 1 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的精密度 (n=5)
分析物 标示浓度 (ng/ml) 日内 日间 测定浓度 (ng/ml) 精密度(CV%) 准确性(RE%) 测定浓度 (ng/ml) 精密度(CV%) 准确性(RE%) 尿嘧啶 10 10.2±0.38 3.74 2.58 10.12±0.78 7.70 1.18 20 20.63±1.21 5.87 3.15 19.97±1.35 6.74 −0.16 500 529.73±4.64 0.88 5.95 484.32±35.72 7.37 −3.12 1000 1093.33±25.10 2.30 9.33 1098.25±25.16 2.29 9.82 二氢尿嘧啶 10 10.32±0.71 6.86 3.18 10.28±0.65 6.37 2.77 20 19.98±2.19 10.95 −0.12 19.86±1.85 9.31 −0.72 500 517.51±10.69 2.07 3.50 515.66±10.36 2.01 3.13 1000 1079.83±17.91 1.66 7.98 1080.11±24.50 2.27 8.01 
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表 2 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的基质效应和提取回收率
分析物 标识浓度(ng/ml) 基质效应 提取回收率 平均基质效应 CV(%) 平均回收率 CV(%) 尿嘧啶 1000 101.00 6.15 94.98 9.01 20 99.99 3.63 100.01 7.64 二氢尿嘧啶 1000 85.72 2.07 106.47 1.58 20 93.58 4.53 99.54 9.77
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表 3 样品的稳定性(RE%)
分析物 冻融3次 室温放置6 h 置自动进样器24 h 低 高 低 高 低 高 尿嘧啶 100.71 98.34 93.49 106.60 108.20 107.99 二氢尿嘧啶 92.67 92.64 93.61 107.26 106.97 107.15
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