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对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等的标准物质[1]。《中国药典》中并没有明确规定对照品溶液的存放有效期,但《中国药典》和《药品生产质量管理规范》(GMP)均要求使用单位应对对照品溶液的稳定性和使用效期进行验证,通过研究结果来确定内控效期[1-7]。本实验结合日常检验工作的使用率、制剂中间品和成品抽检的周期,挑选5种制剂(维生素E珍珠乳膏、新面醑、复方替硝唑溶液、磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂和地塞米松磷酸钠滴鼻液),涉及8种常用的对照品(维生素E、甲硝唑、氯霉素、水杨酸、替硝唑、醋酸氯己定、磺胺嘧啶和地塞米松磷酸酯),按照相应的质量标准方法进行测定[8-14],考察各对照品储备液在2~10 ℃冰箱中的稳定性,为存放效期提供必要依据,从而规定对照品储存的内控时间[15-18]。
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色谱柱:Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇,流速为1.5 ml/min,检测波长为284 nm,进样量为10 μl。
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色谱柱:Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.04%磷酸溶液(V∶V=47∶53),流速为1.0 ml/min,检测波长为284 nm,进样量为10 μl。
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色谱柱:Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇为流动相A,以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.5)(V∶V=20∶80)为流动相B,梯度洗脱(0~8 min,0%~55% A;8~15 min,55% A;15~15. 1 min,55%~0% A;15. 1~20 min,0% A),流速为1.0 ml/min,检测波长为280 nm,进样量为10 μl。
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色谱柱:Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.3%醋酸铵溶液(V∶V=20∶80),流速为1.0 ml/min,检测波长为260 nm,进样量为10 μl。
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色谱柱:Hypersil BDS C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为0.75%三乙胺溶液(磷酸调pH 至3.0)-甲醇-乙腈(V∶V∶V = 55∶40∶5),流速为1.0 ml/min,检测波长为242 nm,进样量为10 μl。
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精密称取维生素E对照品约10 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml中约含维生素E 0.2 mg的对照品溶液。
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精密称取甲硝唑、氯霉素对照品各约10 mg,分别置10 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀;另精密称取水杨酸对照品约12.5 mg,置100 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取上述甲硝唑、氯霉素对照品稀释液各5 ml、水杨酸对照品稀释液10 ml,置于同一25 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml中约含甲硝唑、氯霉素和水杨酸分别为0.2 mg、0.2 mg和0.05 mg的混合对照品溶液。
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精密称取替硝唑对照品约10 mg、醋酸氯己定对照品约10 mg置于同一50 ml量瓶中,加水溶解并稀释成每1 ml中约含替硝唑、醋酸氯己定各0.2 mg的混合对照品溶液。
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精密称取磺胺嘧啶对照品约12.5 mg,置25 ml量瓶中,加稀盐酸1 ml溶解后,用流动相稀释至刻度,摇匀。精密量取2 ml,置10 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml中约含磺胺嘧啶0.1 mg的对照品溶液。
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精密称取地塞米松磷酸酯对照品约15 mg,置50 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取稀释液3 ml,置25 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml 约含地塞米松磷酸酯0.036 mg的溶液。
上述对照品溶液均置于具塞的量瓶中,且用封口膜封口,取用后立即冷藏(2~10 ℃)保存,分析前需放至室温。
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按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,详见图1。各色谱条件下,各主成分峰分离度均大于1.5,理论板数满足相应制剂标准要求,且各出峰情况与文献一致[8-14]。
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将上述3种对照品溶液在保存0、1、4、7、10、14、21、28、35 d时,与当天新鲜配制的相应对照品溶液按照相应色谱条件分别进样,分别计算平均峰面积,以当天新鲜配制的对照品溶液计算对照品储存溶液的含量值。
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每个测试时间点的结果都是用新鲜配制的对照品溶液的平均响应值,来重新计算用于研究效期的对照品溶液的标示量,基于下述公式进行计算:
$$ \mathrm{X}\mathrm{\%}=\frac{{\mathrm{A}}_{\mathrm{T}}\times {\mathrm{C}}_{\mathrm{N}}}{{\mathrm{A}}_{\mathrm{N}}\times {\mathrm{C}}_{\mathrm{T}}}\times 100\mathrm{\%} $$ 式中,AN和CN表示新鲜配制对照品的峰面积和浓度;AT和CT表示对照品储存溶液的峰面积和浓度。
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各对照品溶液均未出现浑浊、沉淀等异常现象;测试用对照品溶液与新鲜配制的对照品溶液外观一致;色谱图中均未出现显著的杂质峰;每个分析测试点,要求对照品储存溶液的标示量与零点的差异不得超过2.0%。
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上述各类对照品溶液在2~10 ℃冰箱内密封储存35 d,测试用对照品溶液外观与新配制对照品溶液一致,未出现浑浊、沉淀等现象;色谱中均未出现显著的杂质峰,每个分析测试点,对照品溶液的含量变化如图2所示,维生素E储存35 d、甲硝唑、氯霉素和水杨酸混合对照品储存7 d、替硝唑和醋酸氯己定混合对照品储存35 d、磺胺嘧啶储存35 d、地塞米松磷酸酯储存35 d,含量符合要求。结合含量标准要求,在2~10 ℃冰箱中,维生素E对照品、替硝唑和醋酸氯己定混合对照品、磺胺嘧啶对照品、地塞米松磷酸酯对照品溶液的效期可定为35 d,甲硝唑、氯霉素和水杨酸混合对照品溶液定为7 d。
The investigation of the stability of 8 commonly used reference solutions by HPLC
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摘要:
目的 考察8种常用对照品溶液稳定性,以此确定内控效期。 方法 配制对照品储存溶液,密封保存于2~10 ℃冰箱中,于0、1、4、7、10、14、21、28、35 d采用高效液相色谱法测定各对照品储存溶液与新配制的对照品溶液含量,计算含量变化值。 结果 各对照品溶液在考察期内,外观与新配制对照品溶液一致;色谱中均未出现显著的杂质峰。甲硝唑、氯霉素和水杨酸混合对照品储存7 d,维生素E对照品、替硝唑和醋酸氯己定混合对照品、磺胺嘧啶对照品、地塞米松磷酸酯对照品储存35 d,含量均符合要求。 结论 在2~10 ℃冰箱中,维生素E对照品、替硝唑和醋酸氯己定混合对照品、磺胺嘧啶对照品、地塞米松磷酸酯对照品溶液的效期可定为35 d,甲硝唑、氯霉素和水杨酸混合对照品溶液定为7 d。 Abstract:Objective To investigate the stability of 8 commonly used reference solutions and determine the validity period of internal control. Methods The storage solutions of reference substances were prepared and stored in the refrigerator at 2 to 10 ℃. The content of the storage solutions and the newly prepared reference solutions were determined by HPLC on days 0, 1, 4, 7, 10, 14, 21, 28 and 35, and their change values of the content were calculated. Results During the inspection period, the appearance of each reference solution was consistent with the newly prepared reference solution. There was no significant impurity peak in the chromatography. For mixed references of metronidazole, chloramphenicol and salicylic acid stored for 7 days, vitamin E, mixed references of tinidazole and chlorhexidine acetate, sulfadiazine, dexamethasone phosphate for 35 days, their contents met the requirements. Conclusion Stored in the refrigerator at 2 to 10 ℃, the effective time period of vitamin E reference solution, mixed references solution of tinidazole and chlorhexidine acetate, sulfadiazine reference, dexamethasone phosphate reference solution can be 35 days, and the mixed references solution of metronidazole, chloramphenicol and salicylic acid defined can be 7 days. -
Key words:
- vitamin E /
- new surface Xu /
- compound tinidazole solution /
- sulfadiazine /
- dexamethasone phosphate /
- substance stability /
- HPLC
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