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药物不良反应已成为一个公共卫生问题，其中约30%为药物相互作用（drug-drug interactions，DDIs）所导致[1]。DDI指的是2种以上的药物同时或先后使用时，其中一种药物受到另一种药物的影响而发生理化性质、药动学和药效学明显改变。有文献报道，药动学相互作用发生率最高，约占DDIs的40%[2]。已有研究表明，环孢素A（cyclosporineA，CsA）和伏立康唑（voriconazole，VRZ）之间存在着一定的DDI。VRZ体内呈非线性药动学，主要通过肝脏CYP2C19代谢，其次通过CYP2C9和CYP3A4代谢，CYP2C19呈现基因多态性，个体间的药物代谢和相互作用存在很大差异[3]。同时，CYP3A4是CsA的主要代谢酶，而VRZ对CYP3A4代谢酶具有抑制作用。因此，当CsA和VRZ两药联用时，CsA的代谢会受到抑制，血药浓度升高、体内药物蓄积，导致肝肾毒性等不良反应事件的发生。对于临床医生，如何充分认识和管理好DDI具有较大的挑战性。本研究将在Allo-HSCT患者中，通过自身前后对照研究，探讨VRZ血药浓度与CsA血药浓度的升高幅度是否有相关性，CsA与VRZ相互作用是否存在个体性差异，以指导临床对CsA和VRZ的合理使用。本研究已通过联勤保障部队第九四〇医院伦理委员会审批（2019KYLL039），并签署患者知情同意书。
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患者来源：收集2019年1月—12月在某院造血干细胞移植中心进行Allo-HSCT的患者15例(男性9例，女性6例)，平均年龄25.4岁，体重（54.6±12.49）kg，其中再生障碍性贫血8例，急性髓系白血病3例，急性淋巴细胞白血病4例。
纳入标准：Allo-HSCT的患者，在术前已接受了CsA，初始剂量为2.5 mg/（kg·d），分2次，静脉滴注预防移植物抗宿主病（GVHD）。术后第2 天开始静脉滴注VRZ（200 mg，每日2次）预防侵袭性曲霉菌感染(IA)。
排除标准：①肾功能或肝功能不正常；②正在使用其他药物与CsA或VRZ发生中度至重度DDI。
给药方案：CsA（批号：H20150095，250 mg，诺华制药）初始剂量为2.5 mg/（kg·d），分2次，静脉滴注，待患者消化道耐受后，将静脉用药改为口服。VRZ（批号：H20181102，0.2 g，美国辉瑞）预防给药剂量为200 mg，每日2次，静脉滴注。本研究中CsA和VRZ均为静脉滴注，且在研究期间CsA给药剂量未做调整。
血样采集和监测次数：于次日早晨空腹采静脉血2.0～3.0 ml，置抗凝管（EATA）中，摇匀、送检。采用HPLC-MS/MS方法监测谷浓度[4]。测定CsA给药后3～5 d（即给VRZ前1～3 d，CsA达稳态血药浓度）的血药浓度2次，术后测定VRZ 用药5～7 d时（VRZ达稳态血药浓度），CsA和VRZ同一时间的血药浓度2次。
CsA标准化血药浓度[（dose adjusted blood concentration，C/D）（ng/ml）/（mg/kg）]作为反映药物剂量和浓度的参数。为了方便研究CsA血药浓度的变化，计算CsA的C/D比值。
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数据应用SPSS 20.0软件进行统计分析，不服从正态分布的计量数据以中位数（四分位间距），即M（Q25，Q75）表示，计数及等级资料以构成比（%）表示。采用Wilcoxon符号秩和检验，比较使用VRZ前后CsA的C/D比值的差异。计算VRZ血药浓度和CsA的C/D值之间的Spearman秩相关系数，评估CsA的C/D比值升高与VRZ血药浓度的相关性，P<0.05表示具有显著性差异。
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本研究在2019年1月—12月期间共收集15例患者，CsA测定为60例/次，VRZ测定为30例/次。
移植前，CsA测定30例/次，血药浓度中位数160.35（106.65，196.85）ng/ml，23例/次测定结果低于200 ng/ml，7例/次测定结果在200～400 ng/ml的范围内；移植后，加用VRZ后，测定30例/次，血药浓度中位数为308.75（212.80，360.37）ng/ml，22例/次测定结果在200～400 ng/ml，5例/次未达到200 ng/ml，3例/次超过400 ng/ml。两药联用后，CsA稳态血药浓度升高了92.54%。合用VRZ后，CsA测定结果在有效治疗范围内的例/次达73.30%（22/30），仅有26.67% (8/30) 例/次的测定结果不在有效治疗范围。而合用前仅有23.30% (7/30) 例/次的测定结果在有效治疗范围内。结果见图1。
图 1 CsA血药浓度分布
VRZ的测定结果：移植后测定30例/次，血药浓度中位数1.74（0.48，3.70） μg/ml，1例/次测定结果低于0.5 μg/ml，占3.33%，6例/次测定结果在0.5～0.1 μg/ml，占20.00%，14例/次测定结果在1.0～2.0 μg/ml，占46.67%，9例/次测定结果在2.0～5.0 μg/ml，占30.00%。15例患者VRZ平均血药浓度变异系数（CV）为52.60%。
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15例患者在开始使用VRZ后CsA血药浓度均升高。使用VRZ前，CsA的C/D比值中位数为64.14（25.35，112.36）（ng·/ml）/（mg/kg），使用VRZ后，中位数为123.5（45.88，178.24）（ng/ml）/（mg/kg），进行配对设计非参数检验（Wilcoxon符号秩和检验），两者之间存在显著性差异（P<0.05），可用箱型图表示，见图2。
图 2 伏立康唑给药前后环孢素A的浓度/剂量(C/D)比值
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15例患者测定结果显示，VRZ血药浓度的中位数为1.74（0.48，3.70）μg/ml，CsA的C/D比值增幅中位数为82.61%（8.00%，190.00%），进行Spearman相关性分析得ρ=−0.273，P=0.32，即VRZ血药浓度与CsA的C/D比值升高无显著相关，见图3。
图 3 伏立康唑血药浓度与CsA的C/D比值增幅的关系
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本研究结果表明，在Allo-HSCT患者中，CsA和VRZ两药联用后，CsA稳态血药浓度升高了92.54%，测定结果在有效治疗范围内达73.30%，比合用前的23.30%提高了214.59%。但是10.00%的测定结果超出治疗范围，容易发生肝肾毒性。
EBMT-ELN工作组的标准化实践建议中[5]，预防GVHD 的CsA静脉给药剂量为3 mg/（kg·d），分2次给药。在我们的移植中心，CsA给药剂量为2.5 mg/（kg·d），分2次给药，合用VRZ后，充分利用了DDI，使得大部分CsA血药浓度达到治疗范围。这样降低了过高浓度造成肝肾毒性发生的几率，体现了临床医生用药的合理性。
VRZ的测定结果中，VRZ血药浓度个体变异系数CV为52.60%，充分说明伏立康唑的个体化差异大。VRZ个体化用药:中国药理学学会治疗性药物监测学部实践指南治疗剂量血药浓度要求为0.5～5.0 μg/ml[6]，欧美指南和一些研究大多推荐1.0～5.5μg/ml[7]。关于预防用药的血药浓度范围国内没有明确的指南和共识。德国血液肿瘤学会感染性疾病工作组在《预防血液系统恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的推荐意见》中推荐VRZ用于预防真菌感染时浓度范围为1～2 μg/ml[8]。在本研究中，给予预防剂量VRZ，有46.76%的测定结果在1～2 μg/ml内，23.30%的测定结果<1 μg/ml，30.00%的测定结果>2 μg/ml，这表明德国血液肿瘤学会提出的预防剂量的血药浓度，有可能也适用于中国人群。
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细胞色素P450酶（CYP450）是微粒体混合功能氧化酶系中最重要的氧化酶，在体内几乎90%的药物由CYP450代谢。CYP450酶诱导和抑制所致的代谢性DDI能显著改变联用药物的药动学、药效学及毒副作用[9]。VRZ是一种广谱的三唑类抗真菌药物，用于预防和治疗器官移植患者中曲霉菌感染，它主要是通过肝脏CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4进行代谢，有高度可变的药动学，影响治疗效果和安全性。在体内，VRZ也是代谢酶CYP3A4的强抑制剂。CsA经CYP3A4介导的生物转化而消除，两者联用会引起CsA的清除率明显下降，半衰期明显延长，最终导致CsA血药浓度上升[10]。
在之前的几项研究中，VRZ对CsA血药浓度的影响已进行了评估。在一项随机、双盲、安慰剂对照的交叉研究中，Romero等[11]对14例同时接受口服VRZ肾移植术后患者进行了研究，CsA合用VRZ后未调整CsA剂量时，CsA药时曲线下面积（AUC）是合用前的1.7倍；CsA血药峰浓度（cmax）是合用前的1.13倍。他们建议在开始VRZ治疗时，所有患者CsA的剂量减少50%，但是此研究未评估患者个体间差异。
本研究结果证实静脉滴注VRZ与CsA合用后，两者血药浓度之间存在相互影响；VRZ与CsA之间的DDI程度大小存在很大的差异[C/D比值增幅中位数82.61（8.00%，190.00%）]。
Dresser等 [12]对伊朗Allo-HSCT患者研究表明：CsA的C/D比值增幅与VRZ血药浓度呈显著相关性（ρ=0.482，P=0.046），但是亚组分析中口服VRZ（ρ=0.165，P=0.059），静脉（ρ=0.482，P=0.058），没有显著性差异。Kikuchi等[11]研究表明，口服CsA的C/D比值增幅与口服VRZ血药浓度不呈显著相关性。本研究同样表明静脉滴注CsA的C/D比值增幅与静脉滴注VRZ血药浓度不呈显著相关性（ρ=-0.273，P=0.32）。
综上所述，在Allo-HSCT中，移植患者用药复杂，CsA与VRZ之间存在DDI，VRZ使CsA血药浓度显著升高，但VRZ血药浓度与CsA血药浓度升高幅度无显著相关，表明VRZ与CsA之间的DDI程度大小存在个体差异。同时，VRZ本身在体内代谢、清除受CYP2C19基因多态性、药物相互作用等因素影响，呈非线性药动学特点，个体间差异大，导致通过剂量估计给药后的血药浓度不准确。这就体现了监测CsA与VRZ两者血药浓度并做精细化药物剂量调整尤为重要。
Interaction between cyclosporine A and voriconazole in patients with allogeneic hematopoietic stem cell transplantation
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摘要:
目的 分析异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）患者，静脉滴注伏立康唑（VRZ）与环孢素A（CsA）后的药物相互作用（DDI），为临床精准药物治疗提供依据。 方法 进行一项患者自身对照研究，根据纳入排除标准，收集2019年1月—12月在某院进行Allo-HSCT的患者，采用LC-MS/MS法测定术前CsA给药后3～5 d的血药浓度2次，测定术后VRZ给药5～7 d后，CsA和VRZ同一时间的血药浓度2次，分别求其给药前后CsA、VRZ血药浓度的平均值。使用SPSS 20.0对VRZ给药前后CsA标准化血药浓度（C/D）的差异及VRZ血药浓度对CsA的C/D变化进行统计分析。 结果 共纳入Allo-HSCT患者15例，用Wilcoxon符号秩和检验比较给药VRZ前后，CsA的C/D中位数变化，有显著性差异（P<0.001）。对VRZ血药浓度与CsA的C/D比值增幅进行Spearman相关性分析，两者无显著相关性（ρ=−0.273，P=0.32）。 结论 CsA与VRZ之间存在明显的药物相互作用（DDI），VRZ使CsA血药浓度显著升高，但VRZ与CsA之间的DDI程度大小与VRZ血药浓度无关，可能与患者个体差异有关。 Abstract:Objective To analyze the drug-drug interaction (DDI) between intravenous voriconazole (VRZ) and intravenous cyclosporine (CsA) in patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (Allo-HSCT) and provide an individualized and accurate clinical drug delivery. Methods In a self-contrast study, Allo-HSCT patients from January 2019 to December 2019 were enrolled according to the inclusion and exclusion criteria. These patients were treated with CsA and VRZ successively and the blood concentration of CsA and VRZ before and after 5-7 days of VRZ administration were determined with LC-MS/MS. The correlation between the concentration of VRZ and concentration/dose (C/D) ratio of CsA was analyzed with SPSS20.0. Results A total of 15 patients with ALLo-HSCT were enrolled. Wilcoxon sign rank sum test was used to compare the change of median C/D of CsA before and after VRZ administration, which had shown significant difference (P<0.001). Spearman correlation analysis was conducted on the increase of C/D ratio between VRZ and CsA, which had no significant correlation between them (ρ=−0.273, P=0.32). Conclusions There was obvious drug-drug interaction (DDI) between CsA and VRZ. VRZ increased CsA blood concentration significantly, but there was no significant correlation between VRZ blood concentration and the degree of concentration increase, which might be related to individual difference. -
Key words:
- CsA /
- VRZ /
- blood concentration /
- therapeutic drug monitoring /
- drug interaction
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玄参别名元参、黑参、浙玄参等，为我国传统大宗药材，主产地为浙江、安徽、四川、贵州等地[1-2]。玄参，始载于《神农本草经》，被列为中品，味甘、苦、咸，性微寒[3]；归肺、胃、肾经，具有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效，常用于热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘、目赤、咽痛等症[4-5]。环烯醚萜苷类是玄参的主要有效成分，包括哈巴苷、哈巴俄苷等，临床上主要用于脑缺血、高血压、糖尿病等疾病，具有抗炎、保护心血管、抗肿瘤、免疫调节等作用[6-9]。
关于不同产地玄参有效成分含量测定的报道较少，仅有的报道也只集中在少数产地[10-11]。玄参药材原植物生长环境差别大，不同的生境因子下药材质量参差不齐，且在栽培过程中，栽培品系繁多混杂，严重阻碍了玄参产业的可持续发展。2020版《中国药典》规定将哈巴苷、哈巴俄苷作为玄参药材的质控成分，现代药理学研究也表明哈巴苷、哈巴俄苷具有保护心血管、保护神经的药理作用[12-13]。因此，课题组以哈巴苷和哈巴俄苷成分为指标性成分，收集全国玄参15个主产区玄参种质资源，建立HPLC法对其进行含量测定，分析不同产地玄参环烯醚萜苷类成分之间的差异性，以期为玄参药材质量控制提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 药材
2019年11月至2019年12月，收集浙江磐安、安徽谯城区、贵州阳溪、河南朱庄、四川陇东等15个产地新鲜玄参种质资源，经浙江中医药大学药学教研室秦路平教授鉴定为玄参科植物玄参（Scrophularia ningpoensis Hemsl.）的干燥根，信息见表1。
表 1 不同产地玄参样品信息编号 产地 经度(°) 纬度(°) 海拔（l/m） 降雨量（l/mm） 年平均温度（t/℃） S1 浙江磐安 120.43 29.05 1020 1440.1 17.4 S2 浙江临安 119.72 30.23 1050 1463.3 16.2 S3 杭州植物园 120.13 30.27 25 1400.3 16.1 S4 安徽涡阳 116.22 33.52 40 809.8 15.1 S5 安徽谯城区 115.77 33.88 35 805.0 14.5 S6 安徽利辛 116.20 33.15 22 823.9 14.8 S7 河南太丘 116.13 33.93 32 740.5 14.3 S8 河南南丰 115.20 33.65 34 738.6 14.6 S9 河南朱庄 114.51 33.01 33 740.5 14.3 S10 四川陇东 102.71 30.48 1428 1000.0 12.6 S11 四川永富 102.65 30.55 1456 984.6 13.4 S12 四川五龙 102.77 30.40 1410 993.4 12.5 S13 贵州洛龙 107.71 29.06 832 1170.4 22.1 S14 贵州阳溪 107.57 29.07 1300 1100.3 16.3 S15 贵州玉溪 107.36 29.05 1324 1070.3 15.6 1.2 仪器与试剂
Waters Alliance e2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司）；ZORBAX Eclipse C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）；XS105型电子分析天平（梅特勒-多利多公司）；超纯水仪（美国Millipore公司）；DXF–60D型中药打粉机（广州市大祥电子机械设备有限公司）；KQ–300DV型超声波（广州颖汉科技有限公司）；DHG–9031A型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信试验仪器有限公司）。哈巴苷（B20481）、哈巴俄苷（B20480）对照品均购于上海源叶生物科技有限公司。乙腈（色谱级，美国天地公司），磷酸（色谱级，上海阿拉丁公司），其余试剂均为分析纯。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件
ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）–0.03%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（1～10 min，3%～10% A；10～20 min，10%～33% A；20～25 min，33%～50% A；25～30 min，50%～80% A；30～35 min，80% A；35～37 min，80%～3% A；37～42 min，3% A）；体积流量1.0 ml/min，柱温30 ℃，进样量为10 μl；检测波长为210、280 nm。色谱图见图1。
图 1 玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的色谱图A.对照品（210 nm）；B.对照品（280 nm）；C.供试品（210 nm）；D供试品（280 nm）；1. 哈巴苷；2. 哈巴俄苷。1.3.2 线性关系考察
精密称取哈巴苷、哈巴俄苷对照品适量，用30%甲醇溶液制备成终质量浓度为每1 ml含哈巴苷0.6 mg、哈巴俄苷0.2 mg的混合对照品溶液，于4 ℃冰箱中保存备用。分别精密吸取哈巴苷、哈巴俄苷混合对照品溶液0.34、0.67、1.00、1.40、1.70 ml置于2 ml容量瓶中，30%甲醇溶液定容至2 ml，吸取上述溶液适量，0.45 μm微孔滤膜过滤，按“1.3.1”项下色谱条件依次进样。哈巴苷的检测波长为210 nm，哈巴俄苷的检测波长为280 nm。以对照品溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表2，可知哈巴苷与哈巴俄苷在各自范围内线性关系良好。
表 2 线性关系考察成分 回归方程 线性范围 r 哈巴苷 Y=2964.3X+5156.4 0.1020～0.5100 mg/ml 0.9999 哈巴俄苷 Y=13919X+366.1 0.0340～0.1700 mg/ml 0.9999 1.3.3 供试品溶液制备
将洗净后的玄参根切片，置于60 ℃烘箱中烘至恒定质量，粉碎后过3号筛。精密称取玄参根样品粉末0.25 g，置于25 ml具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25 ml，密塞，称定重量，浸泡1 h，超声处理45 min（300 W, 40 kHz），放冷，再称定重量，用50%甲醇溶液补足损失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。按“1.3.1”项下色谱条件平行测定3次。
1.3.4 精密度试验
精密吸取哈巴苷、哈巴俄苷对照品溶液适量，按“1.3.1”项下色谱条件依次进样6次，测得哈巴苷、哈巴俄苷峰面积RSD分别为0.11%、0.09%，表明仪器精密度良好。
1.3.5 稳定性试验
取浙江磐安样品，按“1.3.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、18、24 h，按“1.3.1”项下色谱条件进样，测得哈巴苷、哈巴俄苷峰面积RSD分别为0.24%、0.17%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
1.3.6 重复性试验
取浙江磐安样品6份，按“1.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件进样，测得哈巴苷、哈巴俄苷含量的RSD分别为0.59%、0.50%，表明该方法重复性良好。
1.3.7 加样回收率试验
取含量已知的浙江磐安样品，精密称定0.125 g, 加入哈巴苷、哈巴俄苷对照品适量，按“1.3.3”项下方法制备成供试品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件进样，计算回收率，结果见表3。
表 3 加样回收率试验结果（n=6）成分 称样量（m/g） 原有量（m /mg） 加入量（m /mg） 测得量（m /mg） 回收率（%） 平均回收率（RSD）（%） 哈巴苷 0.1251 0.0748 0.0748 0.1478 0.9759 97.44（0.93） 0.1250 0.0748 0.0748 0.1476 0.9733 0.1251 0.0748 0.0748 0.1486 0.9866 0.1254 0.0750 0.0750 0.1482 0.9760 0.1253 0.0749 0.0749 0.1480 0.9760 0.1251 0.0748 0.0748 0.1465 0.9586 哈巴俄苷 0.1250 0.1065 0.1065 0.2093 0.9653 97.08（1.24） 0.1254 0.1068 0.1068 0.2126 0.9906 0.1252 0.1067 0.1068 0.2089 0.9569 0.1251 0.1066 0.1068 0.2109 0.9766 0.1253 0.1068 0.1068 0.2096 0.9625 0.1251 0.1066 0.1068 0.2105 0.9728 1.4 数据处理与分析
应用SPSS 19.0软件处理数据。方差分析采用单因素ANOVA分析，聚类分析采用组间连接法[14]。
2. 结果与分析
2.1 哈巴苷与哈巴俄苷含量比较
15个产地间玄参根中哈巴苷、哈巴俄苷的含量存在统计学差异（P<0.01），结果见表4。哈巴苷、哈巴俄苷含量以及两者总量分别为0.791、0.228、1.265 mg/g。四川陇东产哈巴苷含量最高、安徽谯城区含量最低；浙江磐安产哈巴俄苷含量最高，四川永富含量最低；四川陇东产哈巴苷与哈巴俄苷总量最高，杭州植物园最低,含量范围在0.752～1.529 mg/g之间，均符合《中国药典》2020版质量标准。
表 4 不同产地间玄参样品中各成分含量测定结果（$\bar x \pm s$ ，n=3，mg/g）样品 哈巴苷含量 哈巴俄苷含量 哈巴苷与哈巴俄苷总量 S1 0.598±0.003 0.852±0.003 1.450±0.006 S2 0.979±0.002 0.520±0.004 1.499±0.006 S3 0.600±0.007 0.152±0.009 0.752±0.013 S4 0.625±0.003 0.542±0.003 1.167±0.004 S5 0.489±0.002 0.831±0.008 1.320±0.009 S6 0.558±0.003 0.615±0.006 1.173±0.009 S7 0.730±0.021 0.626±0.017 1.355±0.038 S8 0.921±0.007 0.563±0.006 1.484±0.002 S9 0.642±0.004 0.655±0.004 1.297±0.008 S10 1.147±0.006 0.382±0.002 1.529±0.008 S11 0.992±0.016 0.036±0.002 1.029±0.017 S12 0.560±0.002 0.422±0.001 0.983±0.002 S13 0.759±0.006 0.385±0.005 1.144±0.009 S14 1.120±0.009 0.234±0.015 1.355±0.024 S15 1.140±0.007 0.297±0.294 1.434±0.010 均值 0.791** 0.228** 1.265** **P<0.01，表示不同产地的哈巴苷或哈巴俄苷含量存在极显著差异。 2.2 相关性分析
对不同产地之间中的有效成分与生境因子进行相关性分析，结果如表5所示，哈巴苷与海拔、降雨量、年平均温度呈正相关关系，与海拔正相关系数最高为（0.440）；与经度、纬度之间呈负相关关系，与经度负相关系数最高为（–0.419）。哈巴俄苷与经度、纬度呈正相关，与海拔、降雨量、年平均温度呈负相关，与海拔负相关系数最高为（–0.360）。
表 5 玄参中哈巴苷、哈巴俄苷含有量与生境因子相关性分析项目 哈巴苷 哈巴
俄苷经度 纬度 海拔 年降
雨量年平均
温度哈巴苷 1.000 哈巴俄苷 −0.553 1.000 经度 −0.419 0.572 1.000 纬度 −0.341 0.506 0.370 1.000 海拔 0.440 −0.360 −0.620* −0.768** 1.000 年降雨量 0.098 −0.243 0.184 −0.795** 0.508 1.000 年平均温度 0.079 −0.237 −0.005 −0.507 0.009 0.363 1.000 *P<0.05，表示显著相关；**P<0.01，表示极显著相关。 2.3 聚类分析
以哈巴苷、哈巴俄苷含量以及两者总量为参考指标，对15个产地玄参进行聚类分析，根据欧式距离D2=19.98将不同产地划分为3个类群，如图2所示。类群I共5个产地，分别为浙江临安，河南南丰，贵州阳溪、玉溪，四川陇东，该类玄参中哈巴苷含量、哈巴苷和哈巴俄苷总量最高；类群II有8个产地、分别为贵州洛龙，四川五龙，安徽利辛、谯城区、涡阳，浙江磐安，河南太丘、朱庄，这些产地哈巴俄苷含量次之；类群III共有2个产地，分别是四川永富和杭州植物园，这两个产地的哈巴俄苷含量、哈巴苷和哈巴俄苷总量最低。
3. 讨论与结论
本试验采用高效液相法测定玄参哈巴苷与哈巴俄苷含量，经PDA检测器对哈巴苷和哈巴俄苷标准品溶液进行波长扫描，结果显示，哈巴苷的最大检测波长是210 nm，与溶剂甲醇的吸收波长一致，此处会有溶剂峰的出现，而哈巴俄苷的最大检测波长是280 nm，此时基线平稳，未与溶剂峰相重叠，因此，确定检测波长为210 nm和280 nm；采用2020版《中国药典》中哈巴苷与哈巴俄苷的含量测定的提取方法及流动相，结果显示，提取、分离效果良好，哈巴苷与哈巴俄苷在甲醇中超声处理45 min即可提取完全，各峰之间的分离度>1.5，理论塔板数>5000，哈巴苷与哈巴俄苷的保留时间分别是10.107、24.116 min。
药用植物的生长环境对次生代谢产物的积累起着非常关键的作用，包括经纬度、海拔、降雨量等[14]。本实验结果显示，15个产地玄参根中哈巴苷、哈巴俄苷的含量存在统计学差异（P<0.01），其中四川陇东、河南南丰、浙江临安、磐安含量最高；海拔、降雨量、年平均温度与哈巴苷之间呈正相关，与哈巴俄苷呈负相关。课题组发现，浙江临安、磐安的海拔分别是1050 m、1020 m，远高于杭州植物园的25 m，因此，临安、磐安哈巴苷的含量要高于植物园，这与实验结果一致；经纬度与哈巴俄苷呈正相关，且相关系数较大，经纬度越高，哈巴俄苷的含量就越大，四川陇东、永富、五龙的经纬度低于安徽利辛、涡阳、谯城区，因此，前者的哈巴俄苷的含量低于后者。结果显示，经纬度越高越有利于哈巴俄苷的积累，降雨量越大，海拔越高，越有利于哈巴苷的积累，故可优先在拥有上述环境条件的种质中选择。本实验只对玄参中哈巴苷、哈巴俄苷的含量进行测定，下一步将继续增加其他活性成分的含量测定，为玄参的质量控制提供参考依据。
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