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右美托咪定是一种α-2肾上腺素受体激动剂,由于它对认知功能、血流动力学稳定性和呼吸的影响较小,已被广泛用作麻醉辅助剂用于抗焦虑、镇静、术后镇痛等[1-2]。在临床上,我们发现达到相同镇静效果,梗阻性黄疸患者使用右美托咪定的用量低于非黄疸者,故猜测梗阻性黄疸患者使用该药有可能影响其药动学特征。目前,在婴儿、儿童、成人以及在肥胖和低蛋白血症人群中已有右美托咪定的药动学报道[3-6],而对梗阻性黄疸患者相关研究甚少。因此,本研究通过测定患者体内药物浓度,探讨梗阻性黄疸对右美托咪定药动学的影响。
目前已有多种分析方法用于测定血浆中的右美托咪定,包括高效液相色谱法、气相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-串联质谱法[7-9],但这些方法存在分析时间长、灵敏度低、回收率低等缺点。本研究建立一种快速、灵敏、稳定的超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆右美托咪定的浓度,为右美托咪定药动学研究提供一种可靠的分析方法。
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色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 RRHD column (2.1 mm×50 mm, 1.8 μm),甲醇-0.1%甲酸水 (75∶25)为流动相,流速0.2 ml/min,柱温:35 ℃,进样量2 μl,运行时间1.5 min。
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采用AJS ESI正离子模式,多反应离子监测模式(MRM)进行二级扫描;动态反应监测的离子对参数:右美托咪定201→95;卡马西平237→194。离子源参数设置:干燥气温度350 ℃;干燥气流速10 L/min;雾化器压力40 psi;鞘气温度400 ℃;鞘气流速11 L/min;毛细管电压4000 V;喷嘴电压500 V。右美托咪定保留时间为0.9 min,内标保留时间为1.1 min,色谱图如图1所示。
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精密称取右美托咪定对照品10.00 mg,置于10 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得质量浓度为1.00 mg/ml对照品储备液。再采用逐级稀释法配置质量浓度为0.01、0.05、0.1、0.5、1.00、5.00、10.00 ng/ml的系列对照品血浆溶液;随行质控样品中右美托咪定的低、中、高质量浓度分别为0.05、0.50、5.00 ng/ml。以上溶液量于4 ℃冰箱备用。
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取200 μl血浆样品于离心管中,加入20 μl内标溶液、20 μl NaOH (1 mol/L)溶液和1 ml乙酸乙酯-氯甲烷(4∶1, V/V)提取溶剂,涡旋60 s,4 ℃条件下3000×g离心10 min,取上清液800 μl加入离心管中,真空浓缩干燥,加入100 μl流动相溶液,涡旋30 s使残渣溶解,4 ℃条件下3000×g离心10 min,取上清液进样。
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按“2.3”和“2.4”项中的方法制备标准曲线,平行操作5份,按上述UPLC-MS/MS条件,连续进样分析,以对照品浓度 (X)为横坐标,右美托咪定的峰面积与内标的峰面积比值 (Y)为纵坐标,进行线性回归,得线性方程:Y=1.307 2X−0.015 6, r=0.999 8(r=0.999 9),线性范围为0.01~10.00 ng/ml,以信噪比为5时(S/N=5)测得右美托咪定的最低定量限为10 pg/ml,以信噪比为3时(S/N=3)测得右美托咪定的最低检测限为5 pg/ml。
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按“2.3”和“2.4”项中的方法制备低、中、高3种浓度的质控样品,平行操作5份,连续3 d,计算实测浓度。如表1所示,精密度用相对标准偏差(RSD%)表示,结果日内精密度RSD%≤5.9%、日间精密度RSD%≤5.8%;准确度以相对回收率表示,实测浓度与理论加入浓度的比值即为相对回收率。结果表明日内、日间结果准确度范围在91.2%~105.6%。
表 1 右美托咪定在人血浆中的精密度和准确度(n=5)
浓度(ng/ml) 日内 日间 实测浓度(pg/ml) 精密度(%) 准确度(%) 实测浓度(pg/ml) 精密度(%) 准确度(%) 0.05 52.78±3.12 5.9 105.6 51.13±2.97 5.8 102.2 0.50 455.84±13.30 2.9 91.2 455.82±10.04 2.2 91.2 5.00 4939.46±33.17 0.7 98.8 4970.33±144.57 2.9 99.4 -
按“2.3”和“2.4”项中的方法制备低、中、高3种浓度含药血浆,平行操作5份,其待测物的峰面积作为Set 3;取空白人血浆按“2.4”项下处理,甲醇代替内标溶液,真空浓缩干燥后加入相应浓度对照品溶液使残渣溶解,使之浓度与Set 3的待测理论浓度一致,分别制备5份,其峰面积作为Set 2;将待测化合物标准溶液用甲醇稀释,使之与Set 3待测理论浓度一致,进样5次,其峰面积作为Set 1。基质效应为Set 2/Set 1,提取回收率计算公式为Set 3/Set 2,考察内标的基质效应和提取回收率操作步骤同上。低、中、高3种浓度待测物及内标提取回收率均在85.5%~93.1%之间,基质效应均在91.2%~95.6%之间,具体结果见表2。
表 2 待测物基质效应和提取回收率(n=5)
待测物 浓度(ng/ml) 提取回收率(%) 基质效应(%) 右美托咪定 0.05 87.7±s7.1 95.6±6.1 0.50 90.5±5.4 94.3±8.3 5.00 93.1±4.2 91.2±7.9 内标 10.00 85.5±6.8 94.5±6.6 -
按“2.3”和“2.4”项中的方法制备低、中、高3种浓度含药血浆,分别考察样品室温放置6 h后处理,样品前处理后室温放置24 h,3次冻融循环以及−80 ℃保存30 d的稳定性,按“1.9”项操作测定样品浓度,计平均值,并计算RSD%及相对偏差RE%,测定结果的RE范围为95.4%~103.5%,RSD均小于15%,表明样本稳定性良好。
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选取拟进行胆管手术的患者19名。根据术前血清总胆红素水平,分为黄疸组(n=11,平均年龄60.5岁,体重60.1 kg,身高159.8 cm)和对照组(n=8, 平均年龄60.5岁,体重60.1 kg,身高159.8 cm)。术前静脉输注右美托咪定(剂量为1.0 μg/kg),给药后使用含EDTA的采血管收集患者静脉血,采血时间点为0、0.5、1、2、3、5、10、12、15、20、30、40、60、90、120、180、240、300 min。血样经低温离心后,取其上清液于−80 ℃冰箱保存。待收集所有患者血浆后,使用本研究建立的UPLC-MS/MS法测定样品中右美托咪定的浓度。通过WinNonlin 7.0软件,非房室模型计算药动学参数,绘制平均血药浓度-时间曲线,如图2所示。使用SPSS 13.0软件,t-test分析比较两组数据的差异,结果见表3,与非黄疸组相比,梗阻性黄疸患者体内右美托咪定药动学参数cmax增加63.4%(P<0.01),AUC(0−t)、AUC (0−∞)和Vz分别增加78.9%、66.4%、82.5%(P<0.005),CLz降低42.1%(P<0.05)。结果显示,梗阻性黄疸患者体内右美托咪定消除减慢。
表 3 患者静脉推注右美托咪定后的平均药动学参数
参数 对照组 阻塞性黄疸组 P值 cmax (ng/ml) 2.43±0.39 3.97±1.00 <0.01 tmax (t/min) 8.13±2.59 7.91±3.02 NS t1/2 (t/min) 146.72±82.28 135.10±49.92 NS CLz/F (ml∙min−1∙kg−1) 10.20±2.34 6.10±1.05 <0.001 AUC(0-t) (ng∙min∙ml−1) 77.70±15.15 139.16±40.59 <0.005 AUC(0-∞) (ng∙min∙ml−1) 101.94±19.68 169.58±36.62 <0.001 AUMC(0-∞)(ng∙min2∙ml−1) 19 068.07±12619.6 27 436.85±10 299.48 NS Vz(ml/kg) 2 072.09±904.67 1 199.87±454.79 <0.05 MRT(0-∞) (t/min) 172.4±86.81 159.96±60.01 NS 注:cmax:血峰浓度,tmax:达峰时间,t1/2:半衰期,CLz/F:清除率,AUC(0-t):药时曲线面积(0-t),AUC(0-∞):药时曲线面积(0-∞),AUMC(0-∞):一阶药时曲线面积(0-∞),Vz:表观分布容积,MRT(0-∞):平均驻留时间。
Effect of obstructive jaundice on pharmacokinetics of dexmedetomidine in vivo
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摘要:
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆右美托咪定的浓度,评价梗阻性黄疸对患者体内右美托咪定药动学参数的影响。 方法 样品经液-液萃取后测定,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18,流动相为甲醇−0.1%甲酸水溶液,流速为0.2 ml/min,柱温为35 ℃,质谱检测采用动态多反应离子检测模式。 结果 人血浆中右美托咪定在0.01~10.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好,日内和日间精密度均小于15.00%,提取回收率为85.5%~93.1%,基质效应为91.2%~95.6%,样品在分析期间稳定性良好。与对照组相比,梗阻性黄疸患者体内右美托咪定药动学参数cmax、AUC(0−t)、AUC(0−∞)和Vz分别增加63.4%、78.9%、66.4%、82.5%;CLz降低42.1%。 结论 该方法结果准确,灵敏度高,重现性好,适用于检测人血浆右美托咪定的浓度;梗阻性黄疸患者体内右美托咪定消除减慢。 -
关键词:
- 超高效液相色谱-串联质谱 /
- 梗阻性黄疸 /
- 右美托咪定 /
- 药动学
Abstract:Objective To establish a UPLC-MS/MS method for the determination of dexmedetomidine in human plasma and investigate the effect of obstructive jaundice on pharmacokinetics of dexmedetomidine in vivo. Methods Samples were obtained by liquid-liquid extraction. Agilent Eclipse Plus C18 column was used for chromatograph with methanol and 0.1% formic acid-water solution as mobile phase. Flow rate was 0.2 ml/min. The column temperature was 35 ℃, and the MS detection was selected in MRM mode. Results The calibration curves of dexmedetomidine showed good linearity in the ranges of 0.01−10.00 ng/ml. The results of intra and inter-day precisions were both within 15%. The recovery rate was 85.5%−93.1%. Matrix effect was 91.2%−95.6%. Samples remained stable during analysis. Compared with the control group, cmax、AUC(0−t)、AUC(0−∞) and Vz of dexmedetomidine in the patients with obstructive jaundice were increased by 63.4%, 78.9, 66.4%, 82.5%, respectively (P<0.01). CLz was decreased by 42.1%. Conclusion This method is accurate, sensitive and reproducible. It is suitable for dexmedetomidine assay in human plasma. The elimination rate of dexmedetomidine is slower in obstructive jaundice. -
Key words:
- UPLC-MS/MS /
- obstructive jaundice /
- dexmedetomidine /
- pharmacokinetics
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表 1 右美托咪定在人血浆中的精密度和准确度(n=5)
浓度(ng/ml) 日内 日间 实测浓度(pg/ml) 精密度(%) 准确度(%) 实测浓度(pg/ml) 精密度(%) 准确度(%) 0.05 52.78±3.12 5.9 105.6 51.13±2.97 5.8 102.2 0.50 455.84±13.30 2.9 91.2 455.82±10.04 2.2 91.2 5.00 4939.46±33.17 0.7 98.8 4970.33±144.57 2.9 99.4 表 2 待测物基质效应和提取回收率(n=5)
待测物 浓度(ng/ml) 提取回收率(%) 基质效应(%) 右美托咪定 0.05 87.7±s7.1 95.6±6.1 0.50 90.5±5.4 94.3±8.3 5.00 93.1±4.2 91.2±7.9 内标 10.00 85.5±6.8 94.5±6.6 表 3 患者静脉推注右美托咪定后的平均药动学参数
参数 对照组 阻塞性黄疸组 P值 cmax (ng/ml) 2.43±0.39 3.97±1.00 <0.01 tmax (t/min) 8.13±2.59 7.91±3.02 NS t1/2 (t/min) 146.72±82.28 135.10±49.92 NS CLz/F (ml∙min−1∙kg−1) 10.20±2.34 6.10±1.05 <0.001 AUC(0-t) (ng∙min∙ml−1) 77.70±15.15 139.16±40.59 <0.005 AUC(0-∞) (ng∙min∙ml−1) 101.94±19.68 169.58±36.62 <0.001 AUMC(0-∞)(ng∙min2∙ml−1) 19 068.07±12619.6 27 436.85±10 299.48 NS Vz(ml/kg) 2 072.09±904.67 1 199.87±454.79 <0.05 MRT(0-∞) (t/min) 172.4±86.81 159.96±60.01 NS 注:cmax:血峰浓度,tmax:达峰时间,t1/2:半衰期,CLz/F:清除率,AUC(0-t):药时曲线面积(0-t),AUC(0-∞):药时曲线面积(0-∞),AUMC(0-∞):一阶药时曲线面积(0-∞),Vz:表观分布容积,MRT(0-∞):平均驻留时间。 -
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