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儿童哮喘是一种可分为临床缓解期、急性发作期、慢性持续期3个阶段的临床常见呼吸道疾病[1]，其中，以扩张患儿气管、减轻患儿支气管痉挛症状为主要治疗原则的哮喘阶段为急性发作期，常会致使患儿出现胸闷、咳嗽等问题[2]。频繁的急性发作会导致哮喘患儿的生活、学习等均受到影响，并会引起全身炎症反应，甚至导致肺功能损伤，影响机体发育。为解决儿童哮喘急性发作期患者的以上问题，常采用吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂雾化吸入疗法进行治疗，吸入用布地奈德混悬液是一种可减少患者抗体合成、增强患者抗炎能力等作用的吸入型糖皮质激素，而硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂则是一种可用于治疗肺气肿、支气管哮喘及支气管炎（喘息型）所致支气管痉挛的选择性β2-受体激动剂[3]。笔者为系统分析吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂方法在哮喘急性发作期患儿治疗中的效果，并探究其是否会对患儿生长发育造成影响，作以下内容阐述。
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收集北京市第一中西医结合医院于2016年10月至2017年1月收诊的儿童哮喘急性发作期患者68例，分为两组：34例应用硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为对照组，34例应用吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为观察组。纳入标准：①入组对象均符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[4]（中华医学会儿科学分会呼吸学组2008年修订）中有关于小儿哮喘的疾病标准。②对硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂、吸入用布地奈德混悬液等本次研究药物无过敏反应者。③14 d内未曾使用过支气管扩张剂、激素等药物。排除标准：①先天性心脏病患者或严重脏器功能受损者。②其他呼吸系统疾病。③意识、视听、交流、理解等障碍者。④支气管异物者。观察组：女16例，男18例；年龄4～13岁，平均（8.47±1.15）岁；急性发作时间1～8 h，平均为（5.47±0.52）h。对照组：女15例，男19例；年龄4～14岁，平均（8.75±1.09）岁；急性发作时间1～9 h，平均为（5.32±0.54）h。比较以上资料，P>0.05，差异无统计学意义。入组患者临床资料齐全，经本院伦理委员会批准，且均已知情同意。
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医务工作者对两组儿童哮喘急性发作期患者均行传统治疗，包括祛痰、止咳、吸氧、抗感染、解痉挛等。
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硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗。方法：对患儿予硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批准文号：H20090514；GlaxoSmithKline Australia Pty Ltd）进行相应雾化吸入治疗，每次1揿，若患儿病情较重或效果不佳可增至每次2揿，每日3次，单次维持吸入时长为5 min。疗程4周，之后患儿继续进行传统治疗。
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吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂雾化吸入治疗。方法：患儿吸入用布地奈德混悬液（批准文号：H20090903；Astrazeneca pty ltd）和硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂进行相应雾化吸入治疗，其中，硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的用法用量与对照组患儿一致，吸入用布地奈德混悬液每次0.5 mg，若患儿症状严重或效果不佳时可增至每次1 mg，每日3次，单次维持吸入时长为5 min。疗程4周，之后对患儿继续进行传统治疗。
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观察评测两组儿童哮喘急性发作期患者的IL-6、TNF-α、hs-CRP、最大呼吸流量、IS最大呼气量、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间。
用药前、用药4周后于患者晨起（9点前）空腹时作肘静脉血抽取及血清分离操作，IL-6、TNF-α、hs-CRP均应用武汉博士德公司提供的试剂盒、全自动生化分析仪（日立7600型）与酶联免疫吸附试验（ELISA）作相应检测。
最大呼吸流量、IS最大呼气量均应用肺功能测试仪作有效检测；通过CD19-efluro450 设门，应用全血直接计数法对调节性B细胞比例进行分析。
跟踪随访两组患者2年，观察患儿治疗前和随访结束后的生长发育指标[生长激素（GH）、身高和体重]，其中，GH采用ELISA法和美国DRG公司提供的相关试剂进行检测，所有操作均严格按照试剂盒的说明书进行。
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本次研究统计学分析应用SPSS 21.0软件，两组儿童哮喘急性发作期患者的IL-6、TNF-α、hs-CRP、最大呼吸流量、IS最大呼气量、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间和生长发育指标均为计量资料，以（
$\overline x \pm s$ ）的形式表示，进行t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。 -
观察组用药4周后的IL-6、TNF-α、hs-CRP均低于对照组（P<0.05），见表1。
表 1 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后血清炎性因子水平的比较(
$\overline x \pm s$ )组别 例数 IL-6（ng/ml） TNF-α（pg/ml） hs-CRP（mg/L） 治疗前 观察组 n=34 174.56±24.35 24.26±2.83 14.45±2.27 对照组 n=34 174.21±24.74 24.71±2.69 14.37±2.25 t 0.059 0.672 0.146 P >0.05 >0.05 >0.05 治疗后 观察组 n=34 127.84±15.37 8.23±1.21 8.14±1.42 对照组 n=34 145.62±19.48 15.51±1.62 11.18±1.75 t 4.178 20.994 7.866 P <0.01 <0.01 <0.01 -
观察组治疗4周后的最大呼吸流量、IS最大呼气量均高于对照组（P<0.05），见表2。
表 2 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后肺功能的比较(L，
$\overline x \pm s$ )组别 例数 最大呼吸流量（V/L） IS最大呼气量（V/L） 治疗前 观察组 n=34 72.54±8.17 72.65±3.45 对照组 n=34 72.76±8.14 72.91±3.34 t 0.111 0.316 P >0.05 >0.05 治疗后 观察组 n=34 94.75±9.91 94.55±6.94 对照组 n=34 87.74±9.53 87.58±5.57 t 2.973 4.567 P <0.01 <0.01 -
观察组用药4周后的调节性B细胞比例低于对照组（P<0.05），见表3。
表 3 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后调节性B细胞比例的变化(%，
$\overline x \pm s$ )组别 例数 调节性B细胞比例（%） 治疗前 观察组 n=34 14.07±2.45 对照组 n=34 14.22±2.43 t 0.253 P >0.05 治疗后 观察组 n=34 11.42±1.41 对照组 n=34 13.08±1.95 t 4.022 P <0.01 -
观察组用药4周后的喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间均低于对照组（P<0.05），见表4。
表 4 两组患儿治疗前后体征和症状改善情况的比较(t/d，
$\overline x \pm s$ )组别 喘憋消失
时间气促缓解
时间湿啰音消失
时间咳嗽消失
时间观察组（n=34） 2.75±0.47 2.28±0.42 4.05±0.72 5.27±0.48 对照组（n=34） 5.04±0.78 3.11±0.67 6.17±0.94 7.17±0.65 t 14.663 6.120 10.440 13.711 P 0.000 0.000 0.000 0.000 -
观察组随访结束后的生长激素水平、身高和体重均低于对照组（P<0.05），见表5。
表 5 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前和随访结束后的生长发育指标的比较
生长发育
指标观察组（n=34） 对照组（n=34） 治疗前 随访结束后 治疗前 随访结束后 生长激素
（ng/ml）12.97±3.59 10.34±2.19*# 13.08±3.63 11.55±2.42* 身高
（l/cm）105.29±9.63 112.26±9.92*# 105.37±9.52 117.61±10.57* 体重
（m/kg）26.29±2.17 32.01±3.82*# 26.41±2.08 34.29±4.76* * P<0.05,与治疗前比较；# P<0.05,与对照组比较 -
儿童哮喘是一种病因多与环境问题、过敏食物、自身免疫异常、内分泌、遗传、感染等因素有关的儿科常见病[5]，急性发作时的轻度反应一般以胸闷、发作性咳嗽、呼吸困难、喘息等症状为主[6]。针对儿童哮喘急性发作期患者，以往医务工作者常予以化痰、止咳、抗感染、吸氧等基础治疗[7]。如本文表2、表4所示，单独应用硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂改善患儿临床症状的效果不如吸入用布地奈德混悬液与硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的联用治疗。
吸入用布地奈德混悬液是一种可对患儿局部气道产生直接作用的高效糖皮质激素，可减轻患儿呼吸困难、咳嗽、支气管充血、支气管水肿等症状，减少患儿气管过敏活性介质的释放，并有助于平滑肌细胞和内皮细胞的稳定。而硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂则是一种可在短时间内减轻患儿哮喘症状的选择性β2受体激动剂，可增强患儿的激素效能，改善激素受体活性，提升其肺功能[8]。以上两种药物均为现阶段治疗儿童哮喘急性发作期患者的首选用药，临床常通过雾化吸入方式应用吸入用布地奈德混悬液、以及硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂来控制患儿的哮喘症状。该方法具有口咽部刺激小、不良反应少、持续时间长、起效快等特点[9]，可迅速达到解痉平喘、消炎祛痰等的治疗目的[10]。与儿童哮喘发展过程有关的炎性细胞因子一般包括IL-6、TNF-α、hs-CRP等，IL-6是一种可对生物机体炎症、免疫力造成影响的多效性细胞因子；TNF-α是一种可对机体产生免疫调节、炎症、细胞毒性、血管生成、生长抑制等影响的多效性细胞因子；hs-CRP是一种由肝细胞分泌、可对机体炎症状态进行敏感反应的急性期反应蛋白[11]。如本文表1所示，观察组用药4周后的IL-6、TNF-α、hs-CRP均低于对照组（P<0.05）。由结果可知，经吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗后，可有效减轻患儿的炎症反应，降低患儿的气道高反应性。此结论与吴玲玲一文[12]中的结论基本一致。
同时应用吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂还可提升患儿的免疫功能，改善患儿的免疫学指标。如文中表3所示，观察组用药4周后的调节性B细胞比例低于对照组（P<0.05）。调节性B细胞是一种可对患儿体内免疫功能动态平衡进行参与维持的B细胞亚群，其负向调节作用显著，可对患儿免疫调节功能产生间接作用，一旦比例下降，说明其免疫功能活化效果提升[13]。但是观察组随访结束后的GH水平、身高和体重均低于对照组（P<0.05）。其原因可能与吸入用布地奈德混悬液是糖皮质激素药物有关，该类药物可抑制人体的生长激素分泌和表达，并可对患者胶原蛋白与软骨细胞增生合成产生影响，其中，生长激素是患儿生长发育的主要激素，且有研究指出糖皮质激素的使用剂量与对儿童生长发育的影响程度呈正相关[14]。
综上所述，将吸入布地奈德混悬液用于儿童哮喘治疗中，可改善患儿的肺功能与免疫功能，但是会对患儿治疗结束后2年内的生长发育造成一定影响，与2012年儿童哮喘管理项目研究得出的新结论较为一致，同时该研究指出吸入糖皮质激素并不会影响儿童成年后的身高，因此，上述治疗方案的临床应用价值值得肯定。
The therapeutic effect of budesonide on childhood asthma and its influence on growth and development 1 to 2 years after the treatment
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摘要:
目的 探讨吸入布地奈德混悬液用于儿童哮喘治疗中的效果及其用药后1～2年对生长发育的影响。 方法 选择于2016年10月至2017年1月收诊的68例儿童哮喘患者，均为急性发作并持续用药，分为两组：34例应用硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为对照组，34例应用吸入布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为观察组。比较两组儿童哮喘急性发作期患者的白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超敏-C反应蛋白（hs-CRP）、最大呼吸流量、IS最大呼气量、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间，并对比随访2年后的生长发育指标。 结果 用药结束，观察组的IL-6、TNF-α、hs-CRP、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间均低于对照组（P<0.05）；观察组的最大呼吸流量、IS最大呼气量高于对照组（P<0.05）。观察组患儿随访结束后的生长激素水平、身高和体重均低于对照组（P<0.05）。 结论 吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂雾化吸入疗法可缓解患儿的炎症反应，改善患儿的肺功能及免疫功能，加快临床症状的消失，但一定程度上会影响患儿的生长发育。 -
关键词:
- 调节性B细胞 /
- 儿童哮喘急性发作 /
- 硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂 /
- 吸入用布地奈德混悬液 /
- 生长发育
Abstract:Objective To explore the effect of budesonide suspension for inhalation in the treatment of childhood asthma and its influence on growth and development in 1-2 years. Methods The 68 children with asthma admitted to our hospital from October 2016 to January 2017 were selected. Every patient had acute attacks and received continued medication. 34 patients treated with salbutamol sulfate inhaled aerosol were used as the control group. 34 patients treated with budesonide suspension combined with salbutamol sulfate aerosol were classified as the observation group. The interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-α(TNF-α), high-sensitivity-C-reactive protein (hs-CRP), maximum respiratory flow, IS maximum expiratory volume, regulatory B cell ratio, wheezing disappearance time, shortness of breath relief time, wet rales disappearing time, cough disappearing time, and the two year follow-up indicators of growth and development were compared. Results After medication, IL-6, TNF-α, hs-CRP, regulatory B cell ratio, wheezing disappearance time, shortness of breath relief time, moist rales disappearance time, and cough disappearance time were lower in the observation group(P<0.05). The maximum respiratory flow and IS maximum expiratory volume in the observation group were higher than those in the control group (P<0.05). The GH level, height, and weight obtained from two year follow up in the observation group were lower than those in the control group (P<0.05). Conclusion Budesonide suspension combined with salbutamol sulfate aerosol inhalation therapy can alleviate the inflammatory reaction, improve the lung function and immune function of children, and accelerate the disappearance of clinical symptoms, but it will affect the growth and development of children to a certain extent. -
赶黄草（Penthori Chinensis Herba）在民间又名水泽兰、水杨柳等，以其为原料制成的单味成方制剂肝苏颗粒现收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十三册》附录[1]。赶黄草是苗族的传统药物，主产于四川古蔺，具有清热、利湿、解毒、活血、平肝、健脾等功效[2]，可用于酒精性、非酒精性脂肪肝，淤积性、酒精性及其他诱导因素引起的肝损伤的保护和治疗[3-13]。赶黄草中化学成分类型众多，以黄酮类、萜类、酚酸类为其主要活性成分[14]。其中，具有以黄酮苷连接没食子酰基结构的大环多酚类化合物（图1）乔松素-7-O-[4'', 6''-(S)-六羟基二苯甲酰基]-β-D-葡萄糖苷（pinocembrin-7-O-[4'',6''-(S)-hexahydroxydiphenoyl]-β-D-glucose，PHG）、乔松素-7-O-[3''-O-没食子酰基-4'', 6''-(S)-六羟基二苯甲酰基]-β-D-葡萄糖苷（pinocembrin-7-O-[3''-O-galloyl-4",6''-(S)-hexahydroxydiphenoyl]-β-D-glucose，PGHG）、乔松素二氢查耳酮-7-O-[3''-O-没食子酰基-4'', 6''-(S)-六羟基二苯甲酰基]-β-D-葡萄糖苷（pinocembrin dihydrochalcone-7-O-[3''-O-galloyl-4'',6''-(S)-hexahydroxydiphenoyl]-β-D-glucose or thonningianin A，THA）的肝保护及抗肝纤维化活性较强[15-17]，同时也具有较好的降糖活性[18]，有较高的开发价值，故本实验建立HPLC法同时测定该3种化合物的含量，并通过正交试验优选其提取工艺，为该类成分的进一步开发研究提供前期基础。
1. 仪器与试剂
1.1 药材来源
从四川收集3批赶黄草药材（表1），药材经课题组孙连娜副教授鉴定为虎耳草科植物扯根菜（Penthorum chinense Pursh）的干燥地上部分。各批次药材均留样于上海中医药大学中药资源与生物技术研究中心。
表 1 赶黄草药材来源信息表样品编号 采集地区 批号 提供单位 S1 四川古蔺 18110803 四川古蔺肝苏药业有限公司 S2 四川古蔺 18110804 四川古蔺肝苏药业有限公司 S3 四川古蔺 19050701 四川新荷花中药饮片有限公司 1.2 仪器与试剂
XS105DU 电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；XS104 电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；HDM-10000B 数显电热套（上海利闻科学仪器有限公司）；N-1300旋转蒸发仪（东京理化器械株式会社）；Milli-Q纯水机（美国Millipore公司）；1200型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；Centrifuge 5810R高速台式冷冻离心机（德国Eppendorf公司）。
PHG对照品（批号：20181117）、PGHG对照品（批号：20181103）、THA对照品（批号：20181103）均由本实验室制备，且经HPLC归一化法检测表明纯度均在98%以上；水为超纯水；甲酸（色谱纯，上海麦克林生化科技有限公司）；乙腈（色谱纯，美国Thermo Fisher公司）；乙醇、甲醇（分析纯，上海泰坦科技股份有限公司 ）。
2. 方法与结果
2.1 大环多酚类成分的含量测定
2.1.1 对照品储备液的制备
精密称定PHG、PGHG、THA对照品，加80%甲醇分别制成对照品储备液，质量浓度分别为0.610 4、0.604 4、0.485 2 mg/ml。
2.1.2 供试品溶液的制备
取赶黄草药材粉末（过3号筛）1 g，精密称定后转移至250 ml锥形瓶中，精密移取并加入80%甲醇水溶液100 ml，称重确定初始重量，回流提取1 h，放至常温，加溶剂补至初始重量，摇匀，取样，过膜，取续滤液作供试品溶液。
2.1.3 色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B）；洗脱条件：梯度洗脱（0～20 min，32%→50% A，20～25 min，50%→90% A，25～30 min：90%→32% A）；其他参数：流速为1 ml/min，柱温为30℃，检测波长为280 nm，进样量为10 μl。在此色谱条件下，供试品溶液（图2）中PHG、PGHG、THA与其他成分均达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数以PHG计不低于20 000。
2.1.4 线性关系考察
取“2.1.1”项方法制备的混合对照品溶液，依次稀释2、4、10、50、100倍，分别按“2.1.3”项色谱条件进样测定，以3种成分的进样浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，分别进行HPLC检测，线性拟合得回归方程。PHG、PGHG、THA的回归方程分别为：Y=18 575.798X+5.091 9（r=0.999 9），Y=21 923.382X+29.293 3（r=0.999 9），Y=21 544.589X−13.093 6（r=0.999 9），线性范围依次是6.10～610.40、6.04～604.40、4.85～485.20 μg/ml，以上表明3种化合物线性关系良好。
2.1.5 精密度考察
取对照品溶液，按“2.1.3”项色谱条件进行HPLC检测，连续进样分析6次，记录峰面积。结果显示PHG峰面积的RSD为1.15%，PGHG峰面积的RSD为0.18%，THA峰面积的RSD为0.12%，表明所用仪器精密度良好。
2.1.6 重复性考察
取赶黄草药材（S3，过3号筛）6份，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液，再分别按“2.1.3”项色谱条件进行HPLC检测，记录峰面积，计算含量。结果显示样品中PHG的平均含量为5.83 mg/g，RSD为1.03%；PGHG平均含量为9.99 mg/g，RSD为0.91%；THA平均含量为1.31 mg/g，RSD为0.50%，表明本方法重复性良好。
2.1.7 稳定性考察
取赶黄草药材（S3，过3号筛）1份，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液，分别放置0、4、8、12、24 h后取样，按“2.1.3”项色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示样品中PHG、PGHG、THA峰面积的RSD分别为1.72%、2.44%和4.06%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.1.8 加样回收率考察
取同一批赶黄草药材（S3，过3号筛）6份，每份约0.5 g，精密称定，按照药材含有量1∶1的比例，分别精密加入PHG、PGHG、THA对照品，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项条件进行HPLC分析，记录峰面积，计算回收率。结果显示PHG、PGHG、THA加样回收率分别为102.04%、100.90%、101.55%，对应的RSD值分别为0.88%、0.82%、1.43%，表明该方法可靠。
2.1.9 赶黄草药材的含量测定
取各批次赶黄草药材（S1～S3，过3号筛）各3份，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液后按“2.1.3”项条件进行HPLC分析，记录峰面积并计算含量（表2）。
表 2 赶黄草中3种化合物的含量（n=3）样品编号 PHG/
（mg/g）PGHG/
（mg/g）THA/
（mg/g）总含量/
（mg/g）S1 3.66 5.12 1.99 10.77 S2 7.06 8.26 1.77 17.09 S3 5.69 9.73 1.25 16.67 2.2 提取工艺的优化
2.2.1 提取方法考察
取赶黄草药材（S2）切成3～5 cm小段，称取50 g，加入60%乙醇溶液500 ml，分别采用浸渍法（浸渍24 h）、渗漉法（浸泡24 h后以5 ml/min的流速收集渗漉液）、回流法（加热回流1 h）提取。结果表明，浸渍法平均总提取率为36.67%，渗漉法平均总提取率为36.82%，回流法平均总提取率为71.99%。考察结果为回流法提取效果最佳，因此选择回流法作为提取方法。
2.2.2 正交试验[19-21]
在确定提取方法为回流法的基础上，取赶黄草药材（S2），选择常规回流提取中对提取效果影响较大的因素：溶媒浓度（A）、提取时间（B）、溶媒用量（C）、提取次数（D）作为影响因素，每个因素各取3个水平，在平行操作条件下，设计L9（34）正交试验（表3）。
表 3 正交试验因素水平表水平 A因素 B因素 C因素 D因素 溶媒浓度（%） 提取时间（t/h） 溶媒用量（倍） 提取次数（次） 1 40 1 10 1 2 60 2 20 2 3 80 3 30 3 以PHG、PGHG、THA的总提取率作为考察指标得正交试验结果（表4），根据极差大小可以看出各因素对赶黄草中大环多酚类成分的影响大小为A>B>D>C；进一步方差分析（表5）结果表明，溶媒浓度（A）对提取效果有显著影响（P<0.05），而其他3个因素无显著影响（P>0.05）。因此，根据正交试验得出的最佳组合为A3B1C3D2。
表 4 正交试验结果表试验号 A因素 B因素 C因素 D因素 总提取率（%） 溶媒浓度（%） 提取时间（t/h） 溶媒用量（倍） 提取次数（次） 1 1 1 1 1 32.27 2 1 2 2 2 46.67 3 1 3 3 3 50.47 4 2 1 2 3 50.40 5 2 2 3 1 70.53 6 2 3 1 2 80.07 7 3 1 3 2 92.86 8 3 2 1 3 89.79 9 3 3 2 1 87.56 K1 129.41 175.54 202.15 190.37 K2 201.01 206.99 184.63 219.61 K3 270.21 218.11 213.86 190.66 极差R 46.93 14.19 9.74 9.75 表 5 方差分析表因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 P A 3303.955 2 22.901 F0.05 (2,2)=19
F0.10 (2,2)=9<0.05 B 324.996 2 2.253 >0.10 C 144.274 2 1.000 >0.10 D 188.129 2 1.304 >0.10 误差 144.274 2 − − − 3. 讨论与结论
本实验比较并优化了供试品溶液制备方法，并考察了不同型号色谱柱、不同检测波长、不同流动相组成，在此基础上建立了赶黄草中PHG、PGHG、THA的HPLC检测方法，该法能使样品中测定成分与其他成分达到有效分离，峰型好，可简便快速分析样品，检测结果准确可靠。
在建立含量测定方法的基础上进行提取工艺优化。从毒性大小、常用性角度选择乙醇为溶媒，单因素实验结果显示回流法提取效果最佳，因此选择乙醇热回流法作为提取方法，对常规热回流法影响较大的4个因素进行3个水平设置，建立L9（34）正交试验组，以便考察不同参数设定值对赶黄草中大环多酚成分提取率的影响。通过极差及方差分析发现溶媒浓度（A）即乙醇浓度对提取率有显著性影响，而其他3个因素（B、C、D）均无显著性影响。经正交试验优选后的最佳提取工艺为A3B1C3D2，结合生产实际，从节约原料降低成本的角度，对无明显影响的3个因素进行适当调整，调整后的提取工艺为A3B2C1D2，即取赶黄草干药材，切3～5cm小段，加入10倍体积、浓度为80%的乙醇溶液，回流2次，每次2 h。按照该工艺，取3批药材各5 kg，进行3次放大验证试验，提取率均在90%以上，且RSD值为3.73%，说明该工艺稳定可行，可为赶黄草中该类成分的进一步开发研究打下基础。
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表 1 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后血清炎性因子水平的比较(
$\overline x \pm s$ )组别 例数 IL-6（ng/ml） TNF-α（pg/ml） hs-CRP（mg/L） 治疗前 观察组 n=34 174.56±24.35 24.26±2.83 14.45±2.27 对照组 n=34 174.21±24.74 24.71±2.69 14.37±2.25 t 0.059 0.672 0.146 P >0.05 >0.05 >0.05 治疗后 观察组 n=34 127.84±15.37 8.23±1.21 8.14±1.42 对照组 n=34 145.62±19.48 15.51±1.62 11.18±1.75 t 4.178 20.994 7.866 P <0.01 <0.01 <0.01 
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表 2 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后肺功能的比较(L，
$\overline x \pm s$ )组别 例数 最大呼吸流量（V/L） IS最大呼气量（V/L） 治疗前 观察组 n=34 72.54±8.17 72.65±3.45 对照组 n=34 72.76±8.14 72.91±3.34 t 0.111 0.316 P >0.05 >0.05 治疗后 观察组 n=34 94.75±9.91 94.55±6.94 对照组 n=34 87.74±9.53 87.58±5.57 t 2.973 4.567 P <0.01 <0.01
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表 3 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前后调节性B细胞比例的变化(%，
$\overline x \pm s$ )组别 例数 调节性B细胞比例（%） 治疗前 观察组 n=34 14.07±2.45 对照组 n=34 14.22±2.43 t 0.253 P >0.05 治疗后 观察组 n=34 11.42±1.41 对照组 n=34 13.08±1.95 t 4.022 P <0.01
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表 4 两组患儿治疗前后体征和症状改善情况的比较(t/d，
$\overline x \pm s$ )组别 喘憋消失
时间气促缓解
时间湿啰音消失
时间咳嗽消失
时间观察组（n=34） 2.75±0.47 2.28±0.42 4.05±0.72 5.27±0.48 对照组（n=34） 5.04±0.78 3.11±0.67 6.17±0.94 7.17±0.65 t 14.663 6.120 10.440 13.711 P 0.000 0.000 0.000 0.000
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表 5 两组儿童哮喘急性发作期患者治疗前和随访结束后的生长发育指标的比较
生长发育
指标观察组（n=34） 对照组（n=34） 治疗前 随访结束后 治疗前 随访结束后 生长激素
（ng/ml）12.97±3.59 10.34±2.19*# 13.08±3.63 11.55±2.42* 身高
（l/cm）105.29±9.63 112.26±9.92*# 105.37±9.52 117.61±10.57* 体重
（m/kg）26.29±2.17 32.01±3.82*# 26.41±2.08 34.29±4.76* * P<0.05,与治疗前比较；# P<0.05,与对照组比较
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